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摘要[目的]分析宁波产宁海白枇杷叶的药材品质。[方法]参考2015版《中华人民共和国药典》（一部），分别对4批不同采集地的宁海白枇杷叶进行水分含量、总灰分含量、浸出物含量、重金属检查、砷盐检查、薄层色谱鉴别及齐墩果酸和熊果酸的含量测定。[结果]4批不同采集地的宁海白枇杷叶的检查、鉴别和含量测定结果均符合中国药典的标准。[结论]宁波产宁海白枇杷叶药材品质较高，可以作为药用。
关键词 宁海白枇杷叶；高效液相；药材品质
中图分类号 S567 文献标识码 A 文章编号 0517-6611（2016）28-0139-02
Abstract[Objective]To analyze the medicinal quality of Ninghaibai Folium Eriobotryae produced in Ningbo. [Method]According to the 2015 edition of Chinese Pharmacopoeia， we detected the moisture content， total ash content， extract content， examination of heavy metals and arsenic salts checks， TLC and the content of oleanolic acid and ursolic acid of 4 batch of different mills Ninghaibai Folium Eriobotryae. [Result]The results of check， identification and content determination of 4 batches of different mills Ninghaibai Folium Eriobotryae all conformed to the standard of Chinese Pharmacopoeia. [Conclusion]The medicinal quality of Ninghaibai Folium Eriobotryae produced in Ningbo was better， and Ninghaibai Folium Eriobotryae produced in Ningbo could be use as medicinal materials.
Key words Ninghaibai Folium Eriobotryae； HPLC； Medicinal quality
枇杷叶为蔷薇科植物枇杷[Eriobotrya japonica（Thumb.）Lindl.]的干燥叶，是一味传统中药，味苦，性微寒，归肺、胃经，有化痰止咳、降逆止呕的功效。现代研究发现，枇杷叶中主要含有三萜酸、黄酮、多酚及挥发油类化合物[1]，具有抗炎止咳、抗肿瘤、降血糖、抗氧化等多种活性[2-3]。宁海白枇杷是浙江省宁海县引进白沙枇杷，在独特的地方小气候环境中，经过多年实生选育的新品种，具有果形大、糖度高、风味浓郁等特点。2004年，宁海白枇杷被国家林业局认定为国家级林木推广良种[4]。近年来，宁海白枇杷在宁波市宁海县、象山县及周边地区大量栽种。2009年，宁海白枇杷栽培面积达533.33 hm2，投产面积160 余hm2，产量350 t以上，产值2 000余万元[4]。其质优果售价40～100元/kg，经济效益显著，成为当地农民主要的收入来源。目前尚未见有关宁波产宁海白枇杷叶药材品质研究的相关报道。为此，笔者对宁波产宁海白枇杷叶的水分、总灰分、浸出物、重金属、砷盐、薄层色谱鉴别、齐墩果酸和熊果酸的含量进行了分析，以期为宁海白枇杷叶资源的进一步开发利用提供参考依据。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 仪器。中药粉碎机（上海科恒实业发展有限公司）；鼓风干燥箱（宁波江南仪器厂）；马弗炉（上海一恒科学仪器有限公司）；BS124S型电子分析天平[赛多利斯科学仪器（北京）有限公司]；KQ-100B型超声清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；Agilent1260高效液相色谱仪（美国Agilent公司）。
1.1.2 药材与试剂。宁海白枇杷叶样品共4批，于2015年5月分别采自宁海县长街镇、宁海县一市镇、象山县新桥镇和象山县涂茨镇，经该校中药学院杨雄志教授鉴定，均为蔷薇科枇杷[Eriobotrya japonica（Thumb.）Lindl.]的叶。4批样品均粉碎，过二号药筛，备用。枇杷叶对照药材（中国食品药品检定研究院，批号：121261-201003）；齐墩果酸和熊果酸对照品（中国食品药品检定研究院，批号：110709-200304，110742-200516）。所用试剂均为分析纯或色谱纯。
1.2 方法
1.2.1 薄层色谱鉴别。参考2015版《中华人民共和国药典》（一部）[5]，以枇杷叶对照药材的甲醇提取液，齐墩果酸对照品的甲醇溶液及熊果酸对照品的甲醇溶液为对照进行硅胶G薄层色谱鉴别。点样量均为1 μL，展开剂为甲苯-丙酮（5∶1），显色剂为10%硫酸乙醇溶液。
1.2.2 检查。精密称取样品3 g，采用烘干法[5]测定水分含量，每批样品平行3份。精密称取样品粉末2.5 g，采用总灰分法[5]测定总灰分含量，每批样品平行3份。精密称取样品粉末3 g，采用热浸法[5]，75%乙醇为溶剂，测定浸出物含量，每批样品平行3份。称取样品粉末2 g，采用重金属检查法第二法[6]检查，每批样品平行3份。称取样品粉末2 g，采用砷盐检查法第一法[6]检查，每批样品平行3份。
1.2.3
齐墩果酸和熊果酸含量测定。参考2015版《中华人民共和国药典》（一部）[5]，采用HPLC法测定齐墩果酸和熊果酸的含量。 （1）色谱条件。Agilent Extend-C18色谱柱（4.5 mm×250 mm，5 μm），流动相为乙腈-甲醇-0.5%醋酸铵溶液（65∶10∶20）；检测波长210 nm，流速1 mL/min，柱温30 ℃，理论塔板数不低于8 000，进样量10 μL。
（2）对照品溶液的制备。分别精密称取齐墩果酸和熊果酸对照品2.65 mg和11.10 mg，乙醇溶解并定容至50 mL。齐墩果酸对照品溶液浓度为53 μg/mL，熊果酸对照品溶液浓度为222 μg/mL。
（3）供试品溶液制备及 HPLC分析。参考2015年版《中华人民共和国药典》（一部）[5]，采用乙醇为溶剂，超声法提取，制得供试品溶液，每批样品平行3份。由外标法计算供试品中齐墩果酸和熊果酸的含量。
2 结果与分析
2.1 薄层色谱鉴别结果分析
薄层色谱结果显示：4批宁海白枇杷叶样品与枇杷叶对照品斑点均一致，且均具有与熊果酸对照品一致的斑点。说明4批宁海白枇杷叶中主要成分和对照药材一致，且均含有熊果酸，符合药典标准[5]。
2.2 检查结果分析
4批宁波产宁海白枇杷叶水分、总灰分及浸出物的测定结果见表1，重金属及砷盐的检查结果见表2。4批宁海白枇杷叶样品中的水分含量分别为12.80%、11.23%、12.75%和12.84%，均略低于药典中“不得超过 13.0%[5]”的标准。叶类药材水分含量高低与保存方法、当地的气候环境有一定关系。4批宁海白枇杷叶样品中的总灰分含量分别为8.69%、7.02%、8.22%和8.32%，均略低于药典中“不超过 9.0%[5]”的标准。总灰分包括生理性灰分和酸不溶性灰分，其中酸不溶性灰分更能表征泥、沙等杂质的含量。生长环境、气候条件和土质的差异往往会导致植物生理性灰分的变化。4批宁海白枇杷叶样品中的浸出物含量分别为19.29%、20.36%、19.62%和18.45%，均符合药典中“不得少于 18.0%[5]”的标准。浸出物含量的高低并不能代表药材中有效成分含量的高低，只有当某药材有效成分未明确时，粗略地表示药材品质优劣。4批宁海白枇杷叶样品中重金属限量均小于0.002%，砷盐的限量均小于0.000 2%，符合药典中通行标准。如需具体测定各类重金属及砷盐的含量，可借助原子吸收分光光度法。
2.3 含量测定结果分析 表3表明，4批宁海白枇杷叶样品中齐墩果酸含量较低，而熊果酸含量较高，两者总量分别为1.186%、1.039%、1.072%和1.271%，均高于药典中“不得
少于0.70%[5]”的标准。表明宁波产宁海白枇杷叶的有效成分含量较高，药用品质较高，可作为药用。
3 结论与讨论
我国是枇杷的起源地，种质资源丰富，原产于我国的枇杷属植物有21个大类，我国培育的枇杷栽培品种更是超过100种[7]。枇杷全身是宝，枇杷花性温，可入肺散寒，化痰止咳，润肺下气[8]；枇杷叶更是常用中药，有化痰止咳、降逆止呕的功效。通过对宁波产宁海白枇杷叶的水分、总灰分、浸出物、重金属、砷盐、薄层色谱鉴别、齐墩果酸和熊果酸的含量分析，结果表明宁波产宁海白枇杷叶药材品质符合《中华人民共和国药典》规定，可以作为药用。
参考文献
[1]苏加乐，潘为高，罗彭.枇杷化学成分研究概况[J].亚太传统医药，2015，11（4）：48-50.
[2]李婷，林文津，徐榕青，等.枇杷叶的化学成分和药理作用研究进展[J].中国野生植物资源，2010，29（5）：11-14，20.
[3]黎雪桂.枇杷叶主要提取物药理作用研究进展[J].中国当代医药，2012，19（11）：17-18.
[4]张望舒，郑金土，朱长青.大棚栽培对“宁海白”白沙枇杷果实生长发育和品质特性的影响[J].中国南方果树，2010，39（3）：29-32.
[5]国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].北京：中国医药科技出版社，2015：204-205.
[6]国家药典委员会.中华人民共和国药典：四部[S].北京：中国医药科技出版社，2015：101-102.
[7]袁卫明，宋虎卫，杨益花，等.枇杷SRAP标记体系优化及对枇杷矮化杂交种的鉴定[J].江苏农业科学，2015，43（12）：36-40.
[8]陈晓芳，张倩，吴文倩，等.枇杷花醇提物止咳化痰作用实验研究[J].中成药，2013，35（1）：167-169.
关键词 宁海白枇杷叶；高效液相；药材品质
中图分类号 S567 文献标识码 A 文章编号 0517-6611（2016）28-0139-02
Abstract[Objective]To analyze the medicinal quality of Ninghaibai Folium Eriobotryae produced in Ningbo. [Method]According to the 2015 edition of Chinese Pharmacopoeia， we detected the moisture content， total ash content， extract content， examination of heavy metals and arsenic salts checks， TLC and the content of oleanolic acid and ursolic acid of 4 batch of different mills Ninghaibai Folium Eriobotryae. [Result]The results of check， identification and content determination of 4 batches of different mills Ninghaibai Folium Eriobotryae all conformed to the standard of Chinese Pharmacopoeia. [Conclusion]The medicinal quality of Ninghaibai Folium Eriobotryae produced in Ningbo was better， and Ninghaibai Folium Eriobotryae produced in Ningbo could be use as medicinal materials.
Key words Ninghaibai Folium Eriobotryae； HPLC； Medicinal quality
枇杷叶为蔷薇科植物枇杷[Eriobotrya japonica（Thumb.）Lindl.]的干燥叶，是一味传统中药，味苦，性微寒，归肺、胃经，有化痰止咳、降逆止呕的功效。现代研究发现，枇杷叶中主要含有三萜酸、黄酮、多酚及挥发油类化合物[1]，具有抗炎止咳、抗肿瘤、降血糖、抗氧化等多种活性[2-3]。宁海白枇杷是浙江省宁海县引进白沙枇杷，在独特的地方小气候环境中，经过多年实生选育的新品种，具有果形大、糖度高、风味浓郁等特点。2004年，宁海白枇杷被国家林业局认定为国家级林木推广良种[4]。近年来，宁海白枇杷在宁波市宁海县、象山县及周边地区大量栽种。2009年，宁海白枇杷栽培面积达533.33 hm2，投产面积160 余hm2，产量350 t以上，产值2 000余万元[4]。其质优果售价40～100元/kg，经济效益显著，成为当地农民主要的收入来源。目前尚未见有关宁波产宁海白枇杷叶药材品质研究的相关报道。为此，笔者对宁波产宁海白枇杷叶的水分、总灰分、浸出物、重金属、砷盐、薄层色谱鉴别、齐墩果酸和熊果酸的含量进行了分析，以期为宁海白枇杷叶资源的进一步开发利用提供参考依据。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 仪器。中药粉碎机（上海科恒实业发展有限公司）；鼓风干燥箱（宁波江南仪器厂）；马弗炉（上海一恒科学仪器有限公司）；BS124S型电子分析天平[赛多利斯科学仪器（北京）有限公司]；KQ-100B型超声清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；Agilent1260高效液相色谱仪（美国Agilent公司）。
1.1.2 药材与试剂。宁海白枇杷叶样品共4批，于2015年5月分别采自宁海县长街镇、宁海县一市镇、象山县新桥镇和象山县涂茨镇，经该校中药学院杨雄志教授鉴定，均为蔷薇科枇杷[Eriobotrya japonica（Thumb.）Lindl.]的叶。4批样品均粉碎，过二号药筛，备用。枇杷叶对照药材（中国食品药品检定研究院，批号：121261-201003）；齐墩果酸和熊果酸对照品（中国食品药品检定研究院，批号：110709-200304，110742-200516）。所用试剂均为分析纯或色谱纯。
1.2 方法
1.2.1 薄层色谱鉴别。参考2015版《中华人民共和国药典》（一部）[5]，以枇杷叶对照药材的甲醇提取液，齐墩果酸对照品的甲醇溶液及熊果酸对照品的甲醇溶液为对照进行硅胶G薄层色谱鉴别。点样量均为1 μL，展开剂为甲苯-丙酮（5∶1），显色剂为10%硫酸乙醇溶液。
1.2.2 检查。精密称取样品3 g，采用烘干法[5]测定水分含量，每批样品平行3份。精密称取样品粉末2.5 g，采用总灰分法[5]测定总灰分含量，每批样品平行3份。精密称取样品粉末3 g，采用热浸法[5]，75%乙醇为溶剂，测定浸出物含量，每批样品平行3份。称取样品粉末2 g，采用重金属检查法第二法[6]检查，每批样品平行3份。称取样品粉末2 g，采用砷盐检查法第一法[6]检查，每批样品平行3份。
1.2.3
齐墩果酸和熊果酸含量测定。参考2015版《中华人民共和国药典》（一部）[5]，采用HPLC法测定齐墩果酸和熊果酸的含量。 （1）色谱条件。Agilent Extend-C18色谱柱（4.5 mm×250 mm，5 μm），流动相为乙腈-甲醇-0.5%醋酸铵溶液（65∶10∶20）；检测波长210 nm，流速1 mL/min，柱温30 ℃，理论塔板数不低于8 000，进样量10 μL。
（2）对照品溶液的制备。分别精密称取齐墩果酸和熊果酸对照品2.65 mg和11.10 mg，乙醇溶解并定容至50 mL。齐墩果酸对照品溶液浓度为53 μg/mL，熊果酸对照品溶液浓度为222 μg/mL。
（3）供试品溶液制备及 HPLC分析。参考2015年版《中华人民共和国药典》（一部）[5]，采用乙醇为溶剂，超声法提取，制得供试品溶液，每批样品平行3份。由外标法计算供试品中齐墩果酸和熊果酸的含量。
2 结果与分析
2.1 薄层色谱鉴别结果分析
薄层色谱结果显示：4批宁海白枇杷叶样品与枇杷叶对照品斑点均一致，且均具有与熊果酸对照品一致的斑点。说明4批宁海白枇杷叶中主要成分和对照药材一致，且均含有熊果酸，符合药典标准[5]。
2.2 检查结果分析
4批宁波产宁海白枇杷叶水分、总灰分及浸出物的测定结果见表1，重金属及砷盐的检查结果见表2。4批宁海白枇杷叶样品中的水分含量分别为12.80%、11.23%、12.75%和12.84%，均略低于药典中“不得超过 13.0%[5]”的标准。叶类药材水分含量高低与保存方法、当地的气候环境有一定关系。4批宁海白枇杷叶样品中的总灰分含量分别为8.69%、7.02%、8.22%和8.32%，均略低于药典中“不超过 9.0%[5]”的标准。总灰分包括生理性灰分和酸不溶性灰分，其中酸不溶性灰分更能表征泥、沙等杂质的含量。生长环境、气候条件和土质的差异往往会导致植物生理性灰分的变化。4批宁海白枇杷叶样品中的浸出物含量分别为19.29%、20.36%、19.62%和18.45%，均符合药典中“不得少于 18.0%[5]”的标准。浸出物含量的高低并不能代表药材中有效成分含量的高低，只有当某药材有效成分未明确时，粗略地表示药材品质优劣。4批宁海白枇杷叶样品中重金属限量均小于0.002%，砷盐的限量均小于0.000 2%，符合药典中通行标准。如需具体测定各类重金属及砷盐的含量，可借助原子吸收分光光度法。
2.3 含量测定结果分析 表3表明，4批宁海白枇杷叶样品中齐墩果酸含量较低，而熊果酸含量较高，两者总量分别为1.186%、1.039%、1.072%和1.271%，均高于药典中“不得
少于0.70%[5]”的标准。表明宁波产宁海白枇杷叶的有效成分含量较高，药用品质较高，可作为药用。
3 结论与讨论
我国是枇杷的起源地，种质资源丰富，原产于我国的枇杷属植物有21个大类，我国培育的枇杷栽培品种更是超过100种[7]。枇杷全身是宝，枇杷花性温，可入肺散寒，化痰止咳，润肺下气[8]；枇杷叶更是常用中药，有化痰止咳、降逆止呕的功效。通过对宁波产宁海白枇杷叶的水分、总灰分、浸出物、重金属、砷盐、薄层色谱鉴别、齐墩果酸和熊果酸的含量分析，结果表明宁波产宁海白枇杷叶药材品质符合《中华人民共和国药典》规定，可以作为药用。
参考文献
[1]苏加乐，潘为高，罗彭.枇杷化学成分研究概况[J].亚太传统医药，2015，11（4）：48-50.
[2]李婷，林文津，徐榕青，等.枇杷叶的化学成分和药理作用研究进展[J].中国野生植物资源，2010，29（5）：11-14，20.
[3]黎雪桂.枇杷叶主要提取物药理作用研究进展[J].中国当代医药，2012，19（11）：17-18.
[4]张望舒，郑金土，朱长青.大棚栽培对“宁海白”白沙枇杷果实生长发育和品质特性的影响[J].中国南方果树，2010，39（3）：29-32.
[5]国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].北京：中国医药科技出版社，2015：204-205.
[6]国家药典委员会.中华人民共和国药典：四部[S].北京：中国医药科技出版社，2015：101-102.
[7]袁卫明，宋虎卫，杨益花，等.枇杷SRAP标记体系优化及对枇杷矮化杂交种的鉴定[J].江苏农业科学，2015，43（12）：36-40.
[8]陈晓芳，张倩，吴文倩，等.枇杷花醇提物止咳化痰作用实验研究[J].中成药，2013，35（1）：167-169.