【摘 要】
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从HIV-1IIIB病毒RNA经RT-PCR得到HIV-1蛋白酶编码序列,克隆到pet28a质粒中构建HIV-1蛋白酶表达载体。阳性克隆转染E.coliBL21DE3,经IPTG诱导,蛋白酶以包涵体的形式表达,表达
【机 构】
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中国科学院昆明动物研究所分子免疫药理学实验室,中国医学科学院医学生物学研究所,中国科学院研究生院
【出 处】
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Virologica Sinica
【基金项目】
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国家高技术研究发展计划(2003AA219142);国家“十五”科技攻关计划(2004BA719A14);中国科学院知识创新工程(KSCX2-SW-216;KSCX1-SW-11);云南省自然科学基金(2002C0066M);云南省科技攻关计划(2004NG12)
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从HIV-1IIIB病毒RNA经RT-PCR得到HIV-1蛋白酶编码序列,克隆到pet28a质粒中构建HIV-1蛋白酶表达载体。阳性克隆转染E.coliBL21DE3,经IPTG诱导,蛋白酶以包涵体的形式表达,表达量占菌体总蛋白量的40%。包涵体经TritonX-100洗涤后溶解于8M尿素,溶解后的蛋白溶液经sephacyls-200H.R分子筛柱纯化后纯度达到90%以上,收集蛋白酶峰稀释复性并通过超滤进行浓缩。经检测,纯化的蛋白酶具有较高的活性。用荧光标记的蛋白酶底物检测不同浓度indinavir对蛋白酶活性的影响,表明该方法可以用于蛋白酶抑制剂的筛选。
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