【摘 要】
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目的 比较不同方法沉淀乳腺癌线粒体蛋白对Au芯片分析的影响,为Au芯片研究亚细胞蛋白奠定基础.方法 提取体外培养乳腺癌细胞MCF-7的线粒体蛋白,分别采用丙酮沉淀,三氯醋酸-丙
【机 构】
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四川省医学科学院四川省人民医院检验科,成都,610072;重庆医科大学医学检验系临床检验诊断学教育部重点实验室
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目的 比较不同方法沉淀乳腺癌线粒体蛋白对Au芯片分析的影响,为Au芯片研究亚细胞蛋白奠定基础.方法 提取体外培养乳腺癌细胞MCF-7的线粒体蛋白,分别采用丙酮沉淀,三氯醋酸-丙酮(TCA-丙酮)沉淀,饱和( NH4)2SO4沉淀处理样品,点样Au蛋白芯片,表面增强激光解析蛋白飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)分析蛋白指纹图谱,Biomaker Wizard Software分析软件收集数据.结果 每种方法均重复试验20次,在质荷比(m/z)2000～100 000范围内检测蛋白点数目,统计结果分别为TCA-丙酮沉淀39个,丙酮沉淀71个,饱和(NH4 )2SO4沉淀14个；选择8.6、10.0、11.3、14.0和15.6kD 5个含量较高的蛋白作为标志,采用q检验进行两两分析,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 对分子量(Mr) ＜11 kD的蛋白,丙酮沉淀处理可以获得较好的蛋白指纹图谱,对Mr＞11kD的蛋白TCA-丙酮沉淀处理结果好,综合使用2种方法分别处理样品上样Au芯片可以获得好的线粒体蛋白分析结果.
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