【摘 要】
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目的寻找肝细胞癌(HCC)突变相关肿瘤新抗原，确定其诱导产生的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)可特异性作用于肿瘤细胞，为进行HCC的疫苗免疫治疗提供理论依据。方法分析HCC患者肿瘤组织及其配对的正常组织全基因组和外显子测序数据，寻找肿瘤相关体细胞突变，结合患者人类白细胞抗原(HLA)表型，利用NetMHC软件预测具有较高结合力的突变表位，由此合成相应的多肽。在GEO数据库中选取GSE25097，利用G
【机 构】
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国家癌症中心 国家肿瘤临床医学研究中心 中国医学科学院北京协和医学院肿瘤医院分子肿瘤学国家重点实验室免疫学研究室 100021,国家癌症中心 国家肿瘤临床医学研究中心 中国医学科学院北京协和医学院肿瘤
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目的寻找肝细胞癌(HCC)突变相关肿瘤新抗原，确定其诱导产生的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)可特异性作用于肿瘤细胞，为进行HCC的疫苗免疫治疗提供理论依据。
方法分析HCC患者肿瘤组织及其配对的正常组织全基因组和外显子测序数据，寻找肿瘤相关体细胞突变，结合患者人类白细胞抗原(HLA)表型，利用NetMHC软件预测具有较高结合力的突变表位，由此合成相应的多肽。在GEO数据库中选取GSE25097，利用GPL10687平台统计突变基因在肝癌组织和正常组织中的表达差异。采用实时荧光定量PCR法和免疫组化染色，检测10例HCC患者的肿瘤组织和配对癌旁正常组织中相关基因及其蛋白的表达差异。采用预测的带有突变位点的肿瘤新抗原合成多肽，诱导特异性CTL，检测其对负载有相应抗原的肿瘤细胞的杀伤效果。
结果在全基因组和外显子测序的HCC组织中，TP53的突变率约为40%，LAMA3的突变率约为8%。在GSE25097数据库中，TP53和LAMA3 mRNA在肿瘤组织中的相对表达量分别为1.57±0.02和1.37±0.10，均高于正常组织(分别为0.54±0.01和0.36±0.01，均P<0.05)。实时荧光定量PCR法检测结果显示，TP53 mRNA在肿瘤组织中的相对表达量为0.24±0.03，明显高于癌旁组织(0.11±0.01，P<0.05)；LAMA3 mRNA在肿瘤组织中的相对表达量为0.13±0.06，明显高于癌旁组织(0.01±0.01，P<0.05)。免疫组化染色检测TP53和LAMA3蛋白的表达情况，与实时荧光定量PCR检测结果一致。对中国人群Ⅰ型主要组织相容性抗原(MHC－Ⅰ)基因亚型的统计结果显示，HLA－A2、HLA－A11或HLA－A24三者所占比列高达70%。预测的带有TP53和LAMA3突变位点的肿瘤新抗原多肽所诱导的CTL对负载有相应抗原的靶细胞具有显著杀伤作用，但不具有杀伤负载同一肽段带有正常非突变抗原的靶细胞，对机体正常细胞无杀伤作用。
结论TP53和LAMA3在HCC组织中存在高突变，并且其表达高于正常组织。带有突变位点的肿瘤新抗原多肽所诱导产生的CTL，对表达有该抗原的靶细胞具有特异性杀伤作用，但不影响机体正常细胞。
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