【摘 要】
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目的 探讨利多卡因对爪蟾卵母细胞Nav1.8钠通道的影响.方法 取成年雄性SD大鼠的背根神经节100 mg,以TRIzol试剂提取总RNA,直接进行逆转录反应.以大鼠背根神经节的cDNA为模板,
【机 构】
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上海交通大学医学院附属新华医院麻醉科,第二军医大学附属长海医院麻醉科,中国科学院上海神经科学研究所
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目的 探讨利多卡因对爪蟾卵母细胞Nav1.8钠通道的影响.方法 取成年雄性SD大鼠的背根神经节100 mg,以TRIzol试剂提取总RNA,直接进行逆转录反应.以大鼠背根神经节的cDNA为模板,采用PCR技术合成Nav1.8亚基的mRNA.取出雌性爪蟾卵母细胞,用微量注射器将制备好的Nav1.8钠通道亚基的mRNA注射到爪蟾卵母细胞的胞质中,在18℃下,置于ND96溶液中孵育3～4 d,使用双电极电压钳记录Nav1.8钠离子通道电流.将利多卡因用ND96溶液稀释并制备以下5个浓度:25、50、100、500、800 μmol/L.ND96溶液的灌流速率为2～3 ml/min.记录时,钳制电压为-100mV,命令电压为-90～60 mV,间隔电压梯度为10 mV,实验室温度为22～24 ℃.当连续记录到3个稳定的钠电流后,分别加入以上浓度的利多卡因进行实验,每个爪蟾卵母细胞只记录一种浓度.结果 在不同的命令电压下,可记录到Nav1.8钠电流.利多卡因对Nav1.8钠电流的幅度有明显地抑制作用,随着其浓度的增加,抑制程度也逐渐增强.当利多卡因浓度为800 μmol/L时,Nav1.8钠电流抑制近90%.不同命令电压下利多卡因的平均IC50为186 μmol/L.在不同去极化电压下,同一浓度的利多卡因对Nav1.8钠电流抑制程度的差异无统计学意义(P＞0.05).利多卡因对Nav1.8钠通道的V1/2和失活时间常数无影响(P＞0.05).结论 利多卡因可抑制Nav1.8钠通道,减少钠离子内流,但对通道的电压门控特性无明显影响.
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