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【分类号】：R286
【摘要】 目的 建立腰痛片中芍药苷的含量测定方法。方法 采用高效液相色谱法，Shimpack VP-ODS C18（4.6 mm×150 mm，5 μm）为色谱柱，甲醇-0.05%磷酸（体积比40∶65）为流动相，检测波长为230 nm，流速为1.0 ml/min。结果 芍药苷线性范围为0.1448～2.8960 μg，平均回收率为100.4%，RSD为1.53%（n=6）。结论 该方法操作简便，结果准确，灵敏度高，重现性好，能有效控制腰痛片的质量。
【关键词】 腰痛片；芍药苷；高效液相色谱法
腰痛片收载于《部颁标准》中药分册第5册，由杜仲叶、续断、赤芍等12味中药组成，具有强腰补肾、活血止痛的功效，临床效果较好。部颁标准中没有收载该制剂的含量测定指标。已有文献采用HPLC法测定该制剂中补骨脂素和异补骨脂素的含量。赤芍具有清热凉血，散瘀止痛的功效，能反映腰痛片活血止痛的功效，因此本文选择芍药苷作为腰痛片含量测定的指标，采用HPLC法测定制剂中芍药苷的含量，为制订该制剂的质量标准提供实验依据。
1 仪器与试药
Agilent 1100型高效液相色谱仪（美国，Agilent）； Branson SB3200超声波清洗仪（上海，Branson）；色谱柱为Shimpack VP-ODS C18（4.6 mm×150 mm，5 μm）。
腰痛片（桂林三金药业股份有限公司，基片重0.35 g）；芍药苷对照品（供含量测定用，中国药品生物制品检定所提供，批号为110736-200423）；甲醇、磷酸均为色谱纯（天津四友）；水为去离子纯化水；其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：Shimpack VP-ODS C18（4.6 mm×150 mm，5 μm）；以甲醇-0.05%磷酸（体积比40∶65）为流动相；流速为1.0 mL/min；检测波长为230 nm；进样量10 μL；理论板数按芍药苷峰计算应不低于3 000。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取经五氧化二磷减压干燥36 h的芍药苷对照品适量，加甲醇制成每1 mL含60 μg的溶液，即得。
2.3 供试品溶液的制备
取本品10片，去糖衣，研细，取约1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入体积分数为50%的甲醇50 mL，称定重量，超声处理（功率400 W，频率50 kHz）30 min，放冷，再称定重量，用体积分数为50%的甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.4 阴性对照品溶液的制备
取处方组成中除赤芍外的其余成分，按“2.3”项处理，制成阴性对照品溶液。
2.5 专属性检查
吸取供试品溶液、对照品溶液、阴性对照溶液各10 μL注入色谱仪，测定。结果表明，阴性对照品在供试品相应的位置没有干扰。
2.6 线性及范围
精密称取芍药苷对照品3.62 mg，置5 mL量瓶中，加甲醇制成0.724 mg/mL的貯备液。精密吸取上述贮备液配成一系列对照品溶液（0.01448、0.0362、0.0724、0.1448、0.2896 mg/mL），分别精密吸取10 μL注入液相色谱中，测定。以芍药苷质量（m）为横坐标，峰面积（A）为纵坐标，回归方程为：A=11937m+22.9，r=0.9999。结果表明芍药苷进样量在0.1448～2.8960范围内线性关系良好。
2.7 精密度试验
精密吸取对照品溶液（0.0724 mg/mL）10 μL，重复进样6次，芍药苷峰面积RSD为1.82%。
2.8 稳定性试验
分别于0，1，2，3，5，12，24，48 h精密吸取同一批号（批号为20070201）供试品溶液10 μL，按“2.1”项下测定，结果芍药苷峰面积RSD为1.25%，表明供试品在48 h内稳定。
2.9 重复性试验
取同一批号腰痛片（批号为20070201）6份，按“2.3”项下方法制备，并按“2.1”项色谱条件测定芍药苷的含量。结果芍药苷平均含量为3.57 mg/g，RSD为1.93%。
2.10 加样回收率试验
取本品（批号为20070201，含量为3.57 mg/g）约0.3 g，精密称定，加入芍药苷溶液（1.0190 mg/mL）1 mL，按“ 2.3”项方法制备，分别测定，计算回收率。
2.11 样品含量测定
取3批腰痛片分别按“2.3”项方法制成供试品溶液，进样测定芍药苷含量。
3 讨论
3.1 在供试品溶液制备中，考虑到处方中含有药材细粉、树脂及挥发油等低极性的成分，参照2005年版药典中“赤芍”的方法，采用体积分数为50%的甲醇作为提取溶媒。
3.2 在流动性的选择上，参照2005年版药典中“赤芍”及“白芍”项，分别以甲醇-0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液（体积比40∶65）、甲醇-0.05 moL/L磷酸二氢钾溶液-醋酸-异丙醇（体积比67∶173∶4∶4）为流动相进行试验。结果以甲醇-0.05%磷酸（体积比40∶65）为流动相，芍药苷峰有很好的分离度和重现性。
【参考文献】
[1] 尹锦绣.腰痛片治疗腰肌劳损76例疗效观察[J].上海中医药杂志，1999（3）：17.
[2] 陈斌，陈伟，杨根金，等.SPE-GC法测定腰痛片中主要成分的含量[J].中国药学杂志，2000（10）：572-573.
[3] 田永华，钱叶，俞圆.HPLC法测定腰痛片中补骨脂素和异补骨脂素的含量[J].中成药，2007（8）：452-453.
[4] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].北京：化学工业出版社，2005：4.
【摘要】 目的 建立腰痛片中芍药苷的含量测定方法。方法 采用高效液相色谱法，Shimpack VP-ODS C18（4.6 mm×150 mm，5 μm）为色谱柱，甲醇-0.05%磷酸（体积比40∶65）为流动相，检测波长为230 nm，流速为1.0 ml/min。结果 芍药苷线性范围为0.1448～2.8960 μg，平均回收率为100.4%，RSD为1.53%（n=6）。结论 该方法操作简便，结果准确，灵敏度高，重现性好，能有效控制腰痛片的质量。
【关键词】 腰痛片；芍药苷；高效液相色谱法
腰痛片收载于《部颁标准》中药分册第5册，由杜仲叶、续断、赤芍等12味中药组成，具有强腰补肾、活血止痛的功效，临床效果较好。部颁标准中没有收载该制剂的含量测定指标。已有文献采用HPLC法测定该制剂中补骨脂素和异补骨脂素的含量。赤芍具有清热凉血，散瘀止痛的功效，能反映腰痛片活血止痛的功效，因此本文选择芍药苷作为腰痛片含量测定的指标，采用HPLC法测定制剂中芍药苷的含量，为制订该制剂的质量标准提供实验依据。
1 仪器与试药
Agilent 1100型高效液相色谱仪（美国，Agilent）； Branson SB3200超声波清洗仪（上海，Branson）；色谱柱为Shimpack VP-ODS C18（4.6 mm×150 mm，5 μm）。
腰痛片（桂林三金药业股份有限公司，基片重0.35 g）；芍药苷对照品（供含量测定用，中国药品生物制品检定所提供，批号为110736-200423）；甲醇、磷酸均为色谱纯（天津四友）；水为去离子纯化水；其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：Shimpack VP-ODS C18（4.6 mm×150 mm，5 μm）；以甲醇-0.05%磷酸（体积比40∶65）为流动相；流速为1.0 mL/min；检测波长为230 nm；进样量10 μL；理论板数按芍药苷峰计算应不低于3 000。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取经五氧化二磷减压干燥36 h的芍药苷对照品适量，加甲醇制成每1 mL含60 μg的溶液，即得。
2.3 供试品溶液的制备
取本品10片，去糖衣，研细，取约1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入体积分数为50%的甲醇50 mL，称定重量，超声处理（功率400 W，频率50 kHz）30 min，放冷，再称定重量，用体积分数为50%的甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.4 阴性对照品溶液的制备
取处方组成中除赤芍外的其余成分，按“2.3”项处理，制成阴性对照品溶液。
2.5 专属性检查
吸取供试品溶液、对照品溶液、阴性对照溶液各10 μL注入色谱仪，测定。结果表明，阴性对照品在供试品相应的位置没有干扰。
2.6 线性及范围
精密称取芍药苷对照品3.62 mg，置5 mL量瓶中，加甲醇制成0.724 mg/mL的貯备液。精密吸取上述贮备液配成一系列对照品溶液（0.01448、0.0362、0.0724、0.1448、0.2896 mg/mL），分别精密吸取10 μL注入液相色谱中，测定。以芍药苷质量（m）为横坐标，峰面积（A）为纵坐标，回归方程为：A=11937m+22.9，r=0.9999。结果表明芍药苷进样量在0.1448～2.8960范围内线性关系良好。
2.7 精密度试验
精密吸取对照品溶液（0.0724 mg/mL）10 μL，重复进样6次，芍药苷峰面积RSD为1.82%。
2.8 稳定性试验
分别于0，1，2，3，5，12，24，48 h精密吸取同一批号（批号为20070201）供试品溶液10 μL，按“2.1”项下测定，结果芍药苷峰面积RSD为1.25%，表明供试品在48 h内稳定。
2.9 重复性试验
取同一批号腰痛片（批号为20070201）6份，按“2.3”项下方法制备，并按“2.1”项色谱条件测定芍药苷的含量。结果芍药苷平均含量为3.57 mg/g，RSD为1.93%。
2.10 加样回收率试验
取本品（批号为20070201，含量为3.57 mg/g）约0.3 g，精密称定，加入芍药苷溶液（1.0190 mg/mL）1 mL，按“ 2.3”项方法制备，分别测定，计算回收率。
2.11 样品含量测定
取3批腰痛片分别按“2.3”项方法制成供试品溶液，进样测定芍药苷含量。
3 讨论
3.1 在供试品溶液制备中，考虑到处方中含有药材细粉、树脂及挥发油等低极性的成分，参照2005年版药典中“赤芍”的方法，采用体积分数为50%的甲醇作为提取溶媒。
3.2 在流动性的选择上，参照2005年版药典中“赤芍”及“白芍”项，分别以甲醇-0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液（体积比40∶65）、甲醇-0.05 moL/L磷酸二氢钾溶液-醋酸-异丙醇（体积比67∶173∶4∶4）为流动相进行试验。结果以甲醇-0.05%磷酸（体积比40∶65）为流动相，芍药苷峰有很好的分离度和重现性。
【参考文献】
[1] 尹锦绣.腰痛片治疗腰肌劳损76例疗效观察[J].上海中医药杂志，1999（3）：17.
[2] 陈斌，陈伟，杨根金，等.SPE-GC法测定腰痛片中主要成分的含量[J].中国药学杂志，2000（10）：572-573.
[3] 田永华，钱叶，俞圆.HPLC法测定腰痛片中补骨脂素和异补骨脂素的含量[J].中成药，2007（8）：452-453.
[4] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].北京：化学工业出版社，2005：4.