论文部分内容阅读
摘要：为了研究葡萄皮提取物对免疫和血脂的调节作用，按照《保健食品检验与评价技术规范》2003年版中增强免疫力功能检验方法和《关于印发抗氧化功能评价方法等9个保健食品功能评价方法的通知》中附件6辅助降血脂功能评价方法进行动物实验。实验结果显示，血脂实验 与模型组比较，各剂量组葡萄皮提取物能显著降低大鼠血清中总胆固醇TC、甘油三酯TG（P<0.05），高剂量组显著降低低密度脂蛋白LDL-C的含量（P<0.05）;免疫试验 与对照组比较，高剂量组小鼠ConA诱导的脾淋巴细胞增殖能力显著增加（P<0.05），中、高剂量组小鼠对DNFB诱导的DTH反应显著增大（P<0.05）;与对照组比较，中、高剂量组小鼠碳廓清吞噬指数、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬百分率和小鼠吞噬指数均显著增大（P<0.05）;小鼠体液免疫和NK细胞活性无明显影响。说明葡萄皮提取物可以调节大鼠血脂水平，同时可以增强小鼠的免疫力。
关键词：葡萄皮;白藜芦醇;血脂;免疫;甘油三脂;NK细胞
随着社会经济的发展，人们生活水平亦不断提高，饮食结构和生活方式的发生改变，正常人群高脂血症的发病率逐年升高。不止城市人高血脂人群增加，农村高血脂人群增加更快，目前高达20%～30%。高脂血症是引发心脑血管疾病、脂肪肝、肾病的重要危险因素，影响身体免疫状态。因此开发和研制具有调节血脂作用的安全有效的保健品意义重大[1]。
葡萄中除了含有大量的营养成分外， 还含有丰富的生物活性成分，其中原花青素和齐墩果酸等具有降血脂作用。葡萄皮除含有丰富的原花青素外，还含有比葡萄肉和籽中更丰富的白藜芦醇，具有降血脂、抗血栓、预防动脉硬化、增强免疫力等作用[2]。葡萄皮提取物26.6mg/kg.bw灌胃，可有效降低大鼠甘油三酯和总胆固醇[3]。白藜芦醇能使高脂血症大鼠的TC、TG、LDL-c及AI明显降低，升高HDL-C和HDL-C/TC比值[4]。白藜芦醇可提高NK细胞的杀伤活性，提高淋巴细胞转化率[5]。Sfaxi等发现葡萄籽提取物中的总酚和黄酮含量高于葡萄皮提取物，但葡萄皮提取物中的浓缩单宁酸是葡萄籽提取物的3倍，浓缩单宁酸具有调节免疫力的作用[6]。本实验观察葡萄皮提取物对小鼠免疫功能的影响，研究葡萄皮提取物对高血脂大鼠血脂的调节作用。
1材料与方法
1.1受试样品：葡萄皮提取物由天津市尖峰天然产物研究开发有限公司提供。人推荐剂量为1.2g/人/日，白藜芦醇含量为5.08%。
1.2实验动物：选用SPF级昆明种雌性小鼠200只，用于增强免疫功能实验。选用健康SPF级Wistar雄性大鼠50只，用于调节血脂实验。
1.3主要仪器与试剂：动物天平、电子天平、离心机、酶标仪、恒温水浴锅、手术器械、恒温培养箱、显微镜;胆固醇、胆酸钠、血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C），高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）测定试剂盒等。
1.4 高脂饲料：基础饲料78.8% 、胆固醇1% 、蛋黄粉10% 、猪油10% 、胆盐 0.2%。
1.5剂量分组及受试物给予：
增强免疫功能实验分为五个实验组，每组40只小鼠。免疫实验一组进行迟发型变态反应实验;实验二组进行淋巴器官/体重比值测定和碳廓清实验;实验三组进行ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化实验和NK细胞活性测定;实验四组进行血清溶血素的测定和抗体生成细胞检测;实验五组进行小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验。每组实验设置低、中、高三个剂量组和一个空白对照组，三个剂量组分别为人体推荐量的5倍、10倍、30倍，即以0.1g/kg.bw、0.2g/kg.bw、0.6g/kg.bw葡萄皮提取物灌胃小鼠。空白对照组灌胃等体积纯化水。
調节血脂实验：10只大鼠给予维持饲料作为空白对照组，40只给予模型饲料作为模型对照组。模型对照组给予模型饲料8天后，根据TC水平将模型对照组随机分成4组。设置低、中、高三个剂量组和一个模型对照组，三个剂量组分别为人体推荐量的5倍、10倍、30倍，即以0.1g/kg.bw、0.2g/kg.bw、0.6g/kg.bw葡萄皮提取物灌胃大鼠。空白对照组和模型对照组灌胃给予相当体积的去离子水。空白对照组喂食维持饲料，模型对照组和低、中、高剂量组喂食高脂模型饲料。
1.5试验方法
增强免疫功能实验按照《保健食品检验与评价技术规范》2003年版（功能学评价检验方法）进行实验。调节血脂实验按照国家食品药品监督管理局《关于印发抗氧化功能评价方法等9个保健食品功能评价方法的通知》（国食药监保化[2012]107号）附件6辅助降血脂功能评价方法的标准进行实验。
1.6试验数据统计
采用方差分析，按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算F值，F值 2结果与分析
2.1葡萄皮提取物对大鼠血脂的调节作用
2.1.1葡萄皮提取物对大鼠体重的影响：受试样品对各剂量组大鼠体重均无明显影响，与空白对照组及模型对照组比较差异均无显著性（P>0.05）。
2.1.2实验前大鼠血脂含量水平：与模型对照组比较，各剂量组大鼠血清总胆固醇TC、甘油三酯TG、高密度脂蛋白HDL-C、低密度脂蛋白LDL-C含量差异无统计学意义（P>0.05）。空白对照组血清总胆固醇TC、甘油三酯TG和低密度脂蛋白LDL-C显著低于模型对照组，差异有统计学意义（P<0.01）。见表1。 2.1.3实验后大鼠血脂含量水平：与模型对照组比较，各剂量组大鼠血清TC、TG均显著下降，差异有统计学意义（P<0.05）;高剂量组大鼠血清LDL-C含量下降，差异有统计学意义（P<0.05）。各剂量组大鼠血清HDL-C含量差异无统计学意义（P>0.05）。空白对照组大鼠血清TC、TG和LDL-C含量显著低于模型对照组，差异有统计学意义（P<0.01）。见表2。
2.2葡萄皮提取物对小鼠免疫力的调节作用
2.2.1对小鼠体重的影响：五个实验组中，受试样品对各剂量组小鼠体重均无明显影响，与空白对照组比较，差异均无显著性（P>0.05）。
2.2.3对小鼠细胞免疫功能的影响：与空白对照组比较，高剂量组小鼠ConA诱导的脾淋巴细胞增殖能力显著增加，差异有统计学意义（P<0.01）;中、高剂量组小鼠对DNFB诱导的DTH反应显著增大，差异有统计学意义（P<0.05）。
2.2.4对小鼠体液免疫功能的影响：与空白对照组比较，各剂量组小鼠抗体生成细胞数量及血清溶血素含量均无明显变化，无统计学意义（P>0.05）。
2.2.5对小鼠单核-巨噬细胞功能的影响：与空白对照组比较，中、高剂量组小鼠碳廓清吞噬指数、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬百分率和小鼠吞噬指数均显著增大，具有统计学意义（P<0.05）。低剂量小鼠碳廓清吞噬指数、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬百分率和小鼠吞噬指数无明显变化，无统计学意义（P>0.05）。
2.2.6对小鼠NK细胞活性的影响：与空白对照组比较，各剂量组小鼠NK细胞活性均无明显变化，无统计学意义（P>0.05）。
3. 结论
高脂血症可引起内皮细胞的损伤和灶状脱落，可导致血管壁的通透性升高。血浆脂蛋白得以进入内膜。其后引起巨噬细胞的清除反应和血管壁平滑肌细胞增生，并形成斑块。同时，脂质成分也能使细胞膜，包括血小板、内皮细胞、平滑肌细胞等胞膜的脂质成分改变，从而使这些细胞的生物活性发生改变，同时还使体内免疫功能发生改变[7]。高血脂症的脂质代谢紊乱可以诱导巨噬细胞及血管壁细胞产生细胞黏附分子、化学因子及炎症介质，同时损伤血管内皮，激活损伤应答过程。同时脂质成分使细胞膜等胞膜的脂质发生改变，从而使细胞生物活性改变，从而影响体内免疫功能发生改变。
实验结果显示，血脂实验 与模型组比较，各剂量组葡萄皮提取物能显著降低大鼠血清中总胆固醇TC、甘油三酯TG（P<0.05），高剂量组显著降低低密度脂蛋白LDL-C的含量（P<0.05）;免疫试验 与对照组比较，高剂量组小鼠ConA诱导的脾淋巴细胞增殖能力显著增加（P<0.05），中、高剂量组小鼠对DNFB诱导的DTH反应显著增大（P<0.05）;与对照组比较，中、高剂量组小鼠碳廓清吞噬指数、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬百分率和小鼠吞噬指数均显著增大;小鼠体液免疫和NK细胞活性无明显影响。说明葡萄皮提取物可以调节大鼠血脂水平，同时可以增强小鼠的免疫力。
参考文献：
[1]崔晓田.中医药物治疗高脂血症的机制研究[J].山东医学高等专科学校学报，2007，29（1） ： 42.
[2]于红霞，赵秀兰，徐贵发，等.葡萄籽提取物对高脂家兔血脂的影响[J].卫生研究.2002， 31（2）：114-116
[3]刘忠华，刘文杰.葡萄皮提取物与磷虾油对肥胖高脂血症大鼠血脂的影响.山东化工.2016年第45卷：42-43转46
[4]朱立贤，金征宇.白藜芦醇对大鼠实验性高脂血症的影响[J].食品科学，2005，26（10） ： 228.
[5]李覃，袁育康，范桂香，等.白黎蘆醇增强机体免疫调节功能的研究.新疆医学.2004年第34期：14-17
[6] Pathak AK， Dutta N， Banerjee PS， et al. Effect of condensed tannins supplementation through leaf meal mixture on voluntary feed intake， immune response and worm burden in Haemonchus contortus infected sheep[J]. J Parasitic Dis，2016， 40：100-105
[7]任建勋，张卫萍.痰瘀同治对高脂血症大鼠免疫功能影响的实验研究[J].中医药发展与人类健康.2005，11：843-845.
关键词：葡萄皮;白藜芦醇;血脂;免疫;甘油三脂;NK细胞
随着社会经济的发展，人们生活水平亦不断提高，饮食结构和生活方式的发生改变，正常人群高脂血症的发病率逐年升高。不止城市人高血脂人群增加，农村高血脂人群增加更快，目前高达20%～30%。高脂血症是引发心脑血管疾病、脂肪肝、肾病的重要危险因素，影响身体免疫状态。因此开发和研制具有调节血脂作用的安全有效的保健品意义重大[1]。
葡萄中除了含有大量的营养成分外， 还含有丰富的生物活性成分，其中原花青素和齐墩果酸等具有降血脂作用。葡萄皮除含有丰富的原花青素外，还含有比葡萄肉和籽中更丰富的白藜芦醇，具有降血脂、抗血栓、预防动脉硬化、增强免疫力等作用[2]。葡萄皮提取物26.6mg/kg.bw灌胃，可有效降低大鼠甘油三酯和总胆固醇[3]。白藜芦醇能使高脂血症大鼠的TC、TG、LDL-c及AI明显降低，升高HDL-C和HDL-C/TC比值[4]。白藜芦醇可提高NK细胞的杀伤活性，提高淋巴细胞转化率[5]。Sfaxi等发现葡萄籽提取物中的总酚和黄酮含量高于葡萄皮提取物，但葡萄皮提取物中的浓缩单宁酸是葡萄籽提取物的3倍，浓缩单宁酸具有调节免疫力的作用[6]。本实验观察葡萄皮提取物对小鼠免疫功能的影响，研究葡萄皮提取物对高血脂大鼠血脂的调节作用。
1材料与方法
1.1受试样品：葡萄皮提取物由天津市尖峰天然产物研究开发有限公司提供。人推荐剂量为1.2g/人/日，白藜芦醇含量为5.08%。
1.2实验动物：选用SPF级昆明种雌性小鼠200只，用于增强免疫功能实验。选用健康SPF级Wistar雄性大鼠50只，用于调节血脂实验。
1.3主要仪器与试剂：动物天平、电子天平、离心机、酶标仪、恒温水浴锅、手术器械、恒温培养箱、显微镜;胆固醇、胆酸钠、血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C），高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）测定试剂盒等。
1.4 高脂饲料：基础饲料78.8% 、胆固醇1% 、蛋黄粉10% 、猪油10% 、胆盐 0.2%。
1.5剂量分组及受试物给予：
增强免疫功能实验分为五个实验组，每组40只小鼠。免疫实验一组进行迟发型变态反应实验;实验二组进行淋巴器官/体重比值测定和碳廓清实验;实验三组进行ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化实验和NK细胞活性测定;实验四组进行血清溶血素的测定和抗体生成细胞检测;实验五组进行小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验。每组实验设置低、中、高三个剂量组和一个空白对照组，三个剂量组分别为人体推荐量的5倍、10倍、30倍，即以0.1g/kg.bw、0.2g/kg.bw、0.6g/kg.bw葡萄皮提取物灌胃小鼠。空白对照组灌胃等体积纯化水。
調节血脂实验：10只大鼠给予维持饲料作为空白对照组，40只给予模型饲料作为模型对照组。模型对照组给予模型饲料8天后，根据TC水平将模型对照组随机分成4组。设置低、中、高三个剂量组和一个模型对照组，三个剂量组分别为人体推荐量的5倍、10倍、30倍，即以0.1g/kg.bw、0.2g/kg.bw、0.6g/kg.bw葡萄皮提取物灌胃大鼠。空白对照组和模型对照组灌胃给予相当体积的去离子水。空白对照组喂食维持饲料，模型对照组和低、中、高剂量组喂食高脂模型饲料。
1.5试验方法
增强免疫功能实验按照《保健食品检验与评价技术规范》2003年版（功能学评价检验方法）进行实验。调节血脂实验按照国家食品药品监督管理局《关于印发抗氧化功能评价方法等9个保健食品功能评价方法的通知》（国食药监保化[2012]107号）附件6辅助降血脂功能评价方法的标准进行实验。
1.6试验数据统计
采用方差分析，按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算F值，F值
2.1葡萄皮提取物对大鼠血脂的调节作用
2.1.1葡萄皮提取物对大鼠体重的影响：受试样品对各剂量组大鼠体重均无明显影响，与空白对照组及模型对照组比较差异均无显著性（P>0.05）。
2.1.2实验前大鼠血脂含量水平：与模型对照组比较，各剂量组大鼠血清总胆固醇TC、甘油三酯TG、高密度脂蛋白HDL-C、低密度脂蛋白LDL-C含量差异无统计学意义（P>0.05）。空白对照组血清总胆固醇TC、甘油三酯TG和低密度脂蛋白LDL-C显著低于模型对照组，差异有统计学意义（P<0.01）。见表1。 2.1.3实验后大鼠血脂含量水平：与模型对照组比较，各剂量组大鼠血清TC、TG均显著下降，差异有统计学意义（P<0.05）;高剂量组大鼠血清LDL-C含量下降，差异有统计学意义（P<0.05）。各剂量组大鼠血清HDL-C含量差异无统计学意义（P>0.05）。空白对照组大鼠血清TC、TG和LDL-C含量显著低于模型对照组，差异有统计学意义（P<0.01）。见表2。
2.2葡萄皮提取物对小鼠免疫力的调节作用
2.2.1对小鼠体重的影响：五个实验组中，受试样品对各剂量组小鼠体重均无明显影响，与空白对照组比较，差异均无显著性（P>0.05）。
2.2.3对小鼠细胞免疫功能的影响：与空白对照组比较，高剂量组小鼠ConA诱导的脾淋巴细胞增殖能力显著增加，差异有统计学意义（P<0.01）;中、高剂量组小鼠对DNFB诱导的DTH反应显著增大，差异有统计学意义（P<0.05）。
2.2.4对小鼠体液免疫功能的影响：与空白对照组比较，各剂量组小鼠抗体生成细胞数量及血清溶血素含量均无明显变化，无统计学意义（P>0.05）。
2.2.5对小鼠单核-巨噬细胞功能的影响：与空白对照组比较，中、高剂量组小鼠碳廓清吞噬指数、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬百分率和小鼠吞噬指数均显著增大，具有统计学意义（P<0.05）。低剂量小鼠碳廓清吞噬指数、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬百分率和小鼠吞噬指数无明显变化，无统计学意义（P>0.05）。
2.2.6对小鼠NK细胞活性的影响：与空白对照组比较，各剂量组小鼠NK细胞活性均无明显变化，无统计学意义（P>0.05）。
3. 结论
高脂血症可引起内皮细胞的损伤和灶状脱落，可导致血管壁的通透性升高。血浆脂蛋白得以进入内膜。其后引起巨噬细胞的清除反应和血管壁平滑肌细胞增生，并形成斑块。同时，脂质成分也能使细胞膜，包括血小板、内皮细胞、平滑肌细胞等胞膜的脂质成分改变，从而使这些细胞的生物活性发生改变，同时还使体内免疫功能发生改变[7]。高血脂症的脂质代谢紊乱可以诱导巨噬细胞及血管壁细胞产生细胞黏附分子、化学因子及炎症介质，同时损伤血管内皮，激活损伤应答过程。同时脂质成分使细胞膜等胞膜的脂质发生改变，从而使细胞生物活性改变，从而影响体内免疫功能发生改变。
实验结果显示，血脂实验 与模型组比较，各剂量组葡萄皮提取物能显著降低大鼠血清中总胆固醇TC、甘油三酯TG（P<0.05），高剂量组显著降低低密度脂蛋白LDL-C的含量（P<0.05）;免疫试验 与对照组比较，高剂量组小鼠ConA诱导的脾淋巴细胞增殖能力显著增加（P<0.05），中、高剂量组小鼠对DNFB诱导的DTH反应显著增大（P<0.05）;与对照组比较，中、高剂量组小鼠碳廓清吞噬指数、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬百分率和小鼠吞噬指数均显著增大;小鼠体液免疫和NK细胞活性无明显影响。说明葡萄皮提取物可以调节大鼠血脂水平，同时可以增强小鼠的免疫力。
参考文献：
[1]崔晓田.中医药物治疗高脂血症的机制研究[J].山东医学高等专科学校学报，2007，29（1） ： 42.
[2]于红霞，赵秀兰，徐贵发，等.葡萄籽提取物对高脂家兔血脂的影响[J].卫生研究.2002， 31（2）：114-116
[3]刘忠华，刘文杰.葡萄皮提取物与磷虾油对肥胖高脂血症大鼠血脂的影响.山东化工.2016年第45卷：42-43转46
[4]朱立贤，金征宇.白藜芦醇对大鼠实验性高脂血症的影响[J].食品科学，2005，26（10） ： 228.
[5]李覃，袁育康，范桂香，等.白黎蘆醇增强机体免疫调节功能的研究.新疆医学.2004年第34期：14-17
[6] Pathak AK， Dutta N， Banerjee PS， et al. Effect of condensed tannins supplementation through leaf meal mixture on voluntary feed intake， immune response and worm burden in Haemonchus contortus infected sheep[J]. J Parasitic Dis，2016， 40：100-105
[7]任建勋，张卫萍.痰瘀同治对高脂血症大鼠免疫功能影响的实验研究[J].中医药发展与人类健康.2005，11：843-845.