【摘 要】
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将鹅源新城疫病毒的NP、P和L基因通过RT-PCR方法从尿囊液中扩增后分别克隆进pGEM-T easy载体,再分别亚克隆到真核表达载体pCI-neo上,通过酶切、PCR和测序验证克隆正确.利用P
【机 构】
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扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室
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将鹅源新城疫病毒的NP、P和L基因通过RT-PCR方法从尿囊液中扩增后分别克隆进pGEM-T easy载体,再分别亚克隆到真核表达载体pCI-neo上,通过酶切、PCR和测序验证克隆正确.利用P基因开放性阅读框(ORF)上靠近终止密码上游的AgeI位点,将报告基因绿色荧光蛋白(GFP)基因克隆进P基因真核表达重组质粒,分别转染COS-1细胞和CEF细胞,在倒置荧光显微镜下可见到绿色荧光,表明GFP基因已得到表达,由此证明P基因也已得到表达.鹅源新城疫病毒NP、P和L基因的克隆成功,为即将进行的鹅源新城疫病
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