【摘 要】
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目的 探讨长链非编码RNA LINC00312(LncRNA LINC00312)对人病理性瘢痕成纤维细胞凋亡的影响及其可能机制.方法 体外分离培养人病理性瘢痕成纤维细胞,并采用LINC00312 shRNA慢
【机 构】
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三亚市人民医院皮肤性病科,海南三亚572000
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目的 探讨长链非编码RNA LINC00312(LncRNA LINC00312)对人病理性瘢痕成纤维细胞凋亡的影响及其可能机制.方法 体外分离培养人病理性瘢痕成纤维细胞,并采用LINC00312 shRNA慢病毒和阴性对照慢病毒感染细胞,qRT-PCR法检测感染前后细胞中LINC00312的表达水平.根据实验需求,将细胞分为4组:空白对照组(Blank)、阴性对照慢病毒组(NC-shRNA)、LINC00312 shRNA慢病毒组(LINC00312-shRNA)及IRE1α特异性抑制剂组(LINC00312-shRNA+KIRA6).采用CCK-8法检测各组细胞增殖情况;Hoechst染色法观察各组细胞形态变化;Annexin V-FITC/PI法检测各组细胞凋亡情况;Western blot检测各组细胞凋亡相关蛋白cleaved Caspase-3、Bax、Bcl-2以及内质网应激相关蛋白GRP78、IRE1、p-IRE1、JNK、p-JNK的表达水平.结果 LINC00312 shRNA慢病毒感染后细胞中LINC00312的表达水平显著降低(P＜0.05);与Blank组和NC-shRNA组比较,LINC00312-shRNA组细胞增殖活性明显降低,细胞核呈大量碎块致密浓染,凋亡水平明显升高,cleaved Caspase-3、Bax、GRP78、p-IRE1、p-JNK等蛋白表达水平明显升高,Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P＜0.05);与LINC00312-shRNA组比较,LINC00312-shRNA+ KIRA6组细胞增殖活性明显升高,细胞核的碎块致密浓染数量减少,凋亡水平明显降低,cleaved Caspase-3、Bax、GRP78、p-IRE1、p-JNK蛋白表达水平明显降低,而Bcl-2蛋白表达水平明显升高(P＜0.05).结论 沉默LINC00312可能通过激活内质网IRE1-JNK介导的凋亡途径,并诱导人病理性瘢痕成纤维细胞凋亡.
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