血清浓度对人髓核间充质干细胞生物学活性的影响

来源 :中国脊柱脊髓杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hesur
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目的:体外观察、研究不同血清浓度对人正常髓核间充质干细胞(nucleus pulposus mesenchymal stem cells,NPMSCs)生物学活性的影响.方法:选取先天性脊柱侧凸矫形患者手术切除的髓核组织(Pfirrmann分级为Ⅰ级或Ⅱ级),体外分离培养NPMSCs并传代培养.利用流式细胞仪分别对P3代细胞的表型[CD105、CD90、CD73、CD45、CD34和人类白细胞抗原(HLA)-DR]进行检测,并观察其向成骨、成脂和成软骨诱导分化能力.取P3代NPMSCs在无血清(0%)及含有5%和10%体积浓度胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)的DMEM培养基中进行培养,分别对细胞增殖能力、细胞周期、细胞凋亡率进行检测,并利用实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,QRT-PCR)技术检测八聚体结合转录因子4(octamer-binding transcription factor 4,Oct4)、Nanog、Jag1、Notch1干性基因和Ⅰ型胶原、Ⅱ型胶原、蛋白多糖和性别决定区Y框蛋白9(SRY related HMG box-9,SOX-9)的表达量.结果:从正常髓核组织中分离培养的细胞呈纺锤状、贴壁生长,可体外扩增,流式细胞仪检测结果显示细胞高表达 CD73(98.9%)、CD90(97.9%)、CD105(98.9%),低表达 HLA-DR(3.11%)、CD34(1.83%)、CD45(1.19%),且可以向成骨细胞、脂肪细胞及类软骨细胞分化.根据国际干细胞治疗协会(Interna-tional Society for Cellular Therapy,ISCT)评定标准,分离培养的细胞为NPMSCs.随着FBS浓度的降低,细胞增殖率显著下降,细胞凋亡率明显增加,而且可以显著延长G1期时长(P<0.05).QRT-PCR结果显示:随着FBS浓度的下降,干性基因(Oct4、Nanog、Jag1、Notch1)的相对表达量明显减少,Ⅰ型胶原相对表达量增加,Ⅱ型胶原、蛋白多糖和SOX-9的相对表达量减少,差异均具有统计学意义(P<0.05).结论:血清浓度降低可显著抑制NPMSCs细胞增殖、干性基因及相关功能基因的表达.
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