【摘 要】
：
目的:构建抗呋喃它酮代谢物(AMOZ)的衍生物噬菌体单链抗体库。方法:从分泌抗AMOZ的单克隆抗体的杂交瘤细胞系(BC3-E8)中提取总RNA,经RT-PCR反转录成cDNA,设计通用简并引物,PC
【机 构】
：
广东省食品质量安全重点实验室,广州年区广州总医院
【基金项目】
：
国家“863”计划项目(2007AA10Z437);国家自然科学基金项目(30871755);广东省科技厅科技计划项目(2009A020101004);广东省-教育部产学研结合项目(2009B090300409)
论文部分内容阅读
目的:构建抗呋喃它酮代谢物(AMOZ)的衍生物噬菌体单链抗体库。方法:从分泌抗AMOZ的单克隆抗体的杂交瘤细胞系(BC3-E8)中提取总RNA,经RT-PCR反转录成cDNA,设计通用简并引物,PCR扩增抗体重链可变区基因(VH)和轻链可变区基因(VL)。经重叠延伸PCR(SOE-PCR),将VH和VL基因用编码(G1y4Ser)3的linker随机拼接成单链抗体(scFv)基因,然后将其克隆到噬菌粒载体pCANTAB5E中,转化大肠杆菌(Escherichia coli)TG1感受态细胞,经辅助噬菌体M13K07超感染,建立噬菌体单链抗体库。随机挑取10个阳性克隆,经PCR和双酶切鉴定,并测序。登陆DNAMAN软件对序列进行分析、比对。结果:成功扩增VH、VL及scFv基因,并得到库容为1.2×106的噬菌体抗体库,噬菌体的滴度为2.0×1010PFU,PCR鉴定及双酶切鉴定文库重组率较高,软件对序列比对结果显示,scFv基因全长序列之间差异为8.38%,VH序列差异为3.68%,VL序列差异为14.34%,且序列差异多集中在CDR抗原结合区域对应的核酸序列上。结论:已构建抗呋喃它酮代谢物的衍生物噬菌体单链抗体库,为进一步富集筛选并表达抗AMOZ的衍生物的单链抗体提供参考。
其他文献
对服务创新的外部来源、传播途径、外部影响进行研究。在界定外源服务创新的基础上,借鉴Rogers创新扩散理论,构建外源服务创新扩散模型,并结合大量相关文献研究对有效扩散的
为获得不同聚合度的海藻胶寡糖并对其进行确证,以海藻胶经酶解制得的寡糖产品为原料,对其总糖含量、糖醛酸含量以及单糖组成等理化指标进行测定,运用硅胶柱层析对寡糖混合物
目的:观察苏肝清对四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)致小鼠急性肝损伤的保护作用。方法:用CCl4制备小鼠急性肝损伤模型,将小鼠随机分为6组:空白对照组、CCl4模型组、苏肝
目的:探讨腹腔镜与开放式手术治疗小儿腹股沟斜疝的临床疗效。方法:对笔者所在医院近年来收治的84例腹股沟斜疝患儿的临床资料进行回顾性分析,其中对照组40例行传统开放式手
在推进企业管理过程中,以建立完善良性的激励机制为抓手,利用多层次、多层面的激励载体,解决好员工在精神、物质和文化等方面的需求,最大限度激发员工工作热情和创造潜能,从
对于采煤业来说,采煤的技术永远是其生存的根本,这不仅仅决定着它的采煤量的大小,关系到产业的利润问题,还关系到采煤工人的安全问题。分析了煤矿采矿生产技术的应用状况及采
根据我国国情,不难发现房地产企业的当前的发展现状就是起步过晚,发展进程过于缓慢,同时其管理能力始终得不到提高,这些因素都导致了其融资范围缺乏广泛性,并且其投资的决策
目的:观察中药外洗外敷治疗膝骨性关节炎的疗效。方法:采用中药外洗(骨十方)外敷(石膏软膏)治疗膝骨性关节炎60例。结果:总有效率96.67%。提示:本方法对膝骨性关节炎有较好的
目的:研究山慈菇通用药材杜鹃兰（Cremastra appendiculata）及老鸦瓣（Tulipa edulis）的抑瘤及抑菌作用。方法:抗肿瘤动物实验分为3组:空白对照组、阳性对照组与药材组,采用对小鼠
由于生活节奏、家庭人口规模、经济条件等的变化,预制食品在食品体系中的重要性日益增长。主要就国内外冷冻冷藏预制食品产业的现状进行简单阐述,总结冷冻冷藏预制食品发展的