【摘 要】
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目的将已构建验证成功的重组腺病毒Ad-NLS-RARα感染至HL-60细胞中,探讨其对HL-60细胞增殖及全反式维甲酸(ATRA)诱导的HL-60细胞分化的影响及机制。方法将验证正确的腺病毒经
【机 构】
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重庆医科大学附属永川医院中心实验室,重庆医科大学临床检验诊断学教育部重点实验室,
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目的将已构建验证成功的重组腺病毒Ad-NLS-RARα感染至HL-60细胞中,探讨其对HL-60细胞增殖及全反式维甲酸(ATRA)诱导的HL-60细胞分化的影响及机制。方法将验证正确的腺病毒经Protamine sulfate辅助感染HL-60细胞,检测感染效率,用RT-PCR和Western blot检测目的基因在HL-60细胞中的表达情况。MTT法检测细胞增殖情况。病毒感染HL-60细胞24h后,用2.5μmol/L ATRA处理,流式细胞术(FCM)检测细胞表面分化抗原CD11b的表达。RT-PCR和Western blot检测C-MYC基因在mRNA和蛋白水平的表达。结果在Protamine sulfate辅助感染作用下,重组腺病毒Ad-NLS-RARα和阴性对照腺病毒Ad-KZ对HL-60细胞的感染效率可达70%~80%。NLS-RARα基因的RT-PCR和Western blot结果显示,感染了重组腺病毒AdNLS-RARα的HL-60细胞的NLS-RARα基因的mRNA及蛋白表达水平明显增高(P<0.05)。MTT法检测表明感染了重组腺病毒Ad-NLS-RARα的细胞增殖能力增高(P<0.05)。FCM检测结果显示,经ATRA处理后,感染Ad-NLS-RARα重组腺病毒的HL-60细胞,CD11b表达较阴性对照组和未感染组下调(P<0.05)。C-MYC基因的RT-PCR和Western blot检测结果表明,经ATRA处理后,感染Ad-NLS-RARα重组腺病毒的细胞C-MYC基因的mRNA和蛋白水平均高于其他两组(P<0.05)。结论重组腺病毒Ad-NLS-RARα可以促进HL-60细胞的增殖,并通过上调C-MYC基因的表达,抑制ATRA诱导的HL-60细胞分化。
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