【摘 要】
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肿瘤坏死因子α(TNF)为157个氨基酸组成的细胞因子,在克隆的全长cDNA的5'端有480bP的非编码区包括76个氨基酸信号肽编码区。本文采用寡核苷酸指导下的定位基因缺尖突变方
【机 构】
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第四军医大学生物化学教研室,病毒基因工程国家重点实验室
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肿瘤坏死因子α(TNF)为157个氨基酸组成的细胞因子,在克隆的全长cDNA的5'端有480bP的非编码区包括76个氨基酸信号肽编码区。本文采用寡核苷酸指导下的定位基因缺尖突变方法,删除了这一非编码区及信号肽序列,并在成熟TNF分子第一个氨基酸密码前插入一个翻译起始密码(ATG),形成一个限制酶NcoI的识别位点CCATGG。然后取出含有成熟TNF全基因的NcoI-Pst Ⅰ片段,插入到原核表达载体pBV220中,获得了肿瘤坏死因子的高效表达菌株。活性检测结果表明,肿瘤坏死因子的表达量可达3.42
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