【摘 要】
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目的:构建细胞程序性死亡因子4(PDCD4)及其MA3功能域的原核表达载体,并在体外表达及纯化蛋白。方法:提取胃癌细胞株7901总RNA,通过反转录获得c DNA,并通过聚合酶链式反应(PCR
【基金项目】
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国家自然科学基金(81502637);湖北省科技厅知识创新专项(自然科学基金)(2018CFB467)
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目的:构建细胞程序性死亡因子4(PDCD4)及其MA3功能域的原核表达载体,并在体外表达及纯化蛋白。方法:提取胃癌细胞株7901总RNA,通过反转录获得c DNA,并通过聚合酶链式反应(PCR)扩增PDCD4全长及MA3功能域基因片段,定向连接到p GEX-6P-1原核表达载体。将构建好的原核表达载体转化感受态大肠杆菌BL21,异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导目的蛋白表达,采用GST亲和层析的方法获得纯化蛋白,并通过SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳检测和免疫印迹鉴定。结果:PCR获得PDCD4全长及MA3基因片
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