【摘 要】
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以抗氯霉素单克隆抗体杂交瘤细胞株的总RNA为模板,利用RT-PCR法扩增全套抗体轻链、重链基因;经重叠延伸反应,以编码柔性多肽(Gly4Ser)3基因为接头,将轻链、重链基因组装为完
【机 构】
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江苏农牧科技职业学院/江苏省兽用生物制药高技术研究重点实验室
【基金项目】
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安徽省科技攻关计划(编号:1201c0602006);江苏农牧科技职业学院重点项目(编号:ZD1204)
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以抗氯霉素单克隆抗体杂交瘤细胞株的总RNA为模板,利用RT-PCR法扩增全套抗体轻链、重链基因;经重叠延伸反应,以编码柔性多肽(Gly4Ser)3基因为接头,将轻链、重链基因组装为完整的单链抗体(ScFv)基因,并克隆到pGEMT-Easy载体中测序分析。结果表明,所克隆的氯霉素ScFv基因全长为726 bp,为VH-Linker-VL结构,VH基因为345 bp,Linker为(Gly4Ser)3多肽的核酸序列,VL基因为336 bp。本研究首次成功构建抗氯霉素的单链抗体基因,为进一步用于氯霉素的残留检测奠定基础。
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