【摘 要】
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目的:构建一个用于比较研究哺乳动物细胞内表达基因和沉默基因的不同突变机制的质粒载体.方法和结果:设计并构建一种具两个lacⅠ突变靶基因的突变研究载体:pMCLacⅠ/Neo质粒.
【机 构】
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第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室
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目的:构建一个用于比较研究哺乳动物细胞内表达基因和沉默基因的不同突变机制的质粒载体.方法和结果:设计并构建一种具两个lacⅠ突变靶基因的突变研究载体:pMCLacⅠ/Neo质粒.在该质粒中,一个lacⅠ靶基因受CMV启动子的驱动而使其在人和哺乳动物细胞内能表达,而另一个lacⅠ靶基因则不能表达.将所获得的pMCLacⅠ/Neo质粒经酶切鉴定后,再进行如下功能鉴定:一是分析两个lacⅠ靶基因在大肠杆菌细胞内的功能状态,结果显示这两个lacⅠ基因在DH5α宿主菌内功能正常;二是将其导入NIH3T3细胞内,分析两个靶基因是否能模拟哺乳动物细胞内表达基因和沉默基因的功能状态.结果表明其中一个lacⅠ靶基因在NIH3T3细胞中处于转录表达状态.结论:本研究构建了一种新型的突变研究载体,位于该载体上的两个lacⅠ靶基因能模拟人和哺乳动物细胞内表达基因和沉默基因的功能状态.
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