【摘 要】
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目的 探讨衰老心肌中增加的Omi/HtrA2在心肌细胞自噬中的作用.方法 用D-半乳糖干预胎鼠心肌细胞系H9c2建立衰老细胞模型,β-半乳糖苷酶染色观察细胞的衰老情况,cck8试剂盒检
【机 构】
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首都医科大学生理与病理生理学教研室,山东大学海洋学院海洋生物工程教研室,山西医科大学生理学教研室
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目的 探讨衰老心肌中增加的Omi/HtrA2在心肌细胞自噬中的作用.方法 用D-半乳糖干预胎鼠心肌细胞系H9c2建立衰老细胞模型,β-半乳糖苷酶染色观察细胞的衰老情况,cck8试剂盒检测细胞存活率,并以分析细胞乳酸脱氢酶(Lactic Dehydrogenase,LDH)水平反映其活性；给予Omi/HtrA2特异性抑制剂ucf-101降低Omi/HtrA2活性,构建稳转Omi/HtrA2的H9c2细胞株过表达Omi/HtrA2；采用western blot法测定心肌细胞中Omi/HtrA2、beclinl及LC3-Ⅱ蛋白的表达.结果 (1)与H9c2心肌细胞相比,D-半乳糖诱导的H9c2心肌细胞内β-半乳糖苷酶染色阳性率显著升高[(87.7±3.6％)vs(18.3±2.8％),P＜ 0.01]; cck8结果显示,两组之间无显著性差异(P＞0.05),但D-半乳糖诱导的H9c2心肌细胞中LDH活性明显升高(7.07±0.65 vs 5.93±0.34,P＜ 0.01).(2)与H9c2细胞相比,D-半乳糖诱导的H9c2心肌细胞中Omi/HtrA2蛋白表达升高(P＜0.05),而beclinl表达下降(P＜0.01)；给予ucf-101后,衰老细胞中Omi/HtrA2蛋白表达明显下降(P＜0.05),而beclin1表达则进一步降低(P＜0.01).(3)与H9c2细胞相比,过表达Omi/HtrA2的H9c2心肌细胞Omi/HtrA2蛋白表达增高,LC3-Ⅱ蛋白表达也增高(P＜0.05)；给予过表达Omi/HtrA2的H9c2心肌细胞ucf-101后,LC3-Ⅱ表达下降(P＜0.05).结论 衰老心肌细胞中Omi/HtrA2的表达增加可促进心肌细胞自噬.
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