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摘 要 目的：旨在探讨氯胺酮在治疗颅脑损伤方面可能的作用机理和应用前景，为临床上治疗颅脑损伤提供用药基础。方法：取大脑受伤部位，检测脑组织的凋亡细胞。结果：氯胺酮治疗组与同时间段的模型对比较差异有显著性（P＜0.05）。结论：氯胺酮减少凋亡的发生，从而减轻继发性损伤，对脑损伤具有一定的保护作用。
关键词 氯胺酮 凋亡细胞 颅脑损伤
材料与方法
实验分组：SD大鼠70只，适应性喂养3天后，随机分为7组，每组9只。A组（假手术对照组）；B组（颅脑损伤模型对照组，简称损伤对照组），再根据伤后时间段分为伤后6、24、72小时组；C组（颅脑损伤+氯胺酮干预组，简称氯胺酮治疗组），再根据伤后时间段分为伤后6、24、72小时组。
造模：实验采用改进的Feeney自由落体硬膜脊外撞击方法。氯胺酮治疗组在打击致伤后1小时腹腔注射氯胺酮120mg/kg，在设定的时间段取材。假手术组仅切开头皮和颅骨开窗，不用打击锤致脑损伤，术后6小时处死。
脑组织取材：取受伤部位及周围脑组织置于4%多聚甲醛中固定24～36小时，常规脱水、透明、浸蜡、石蜡包埋、连续切片（片厚5μm），一部分切片进行HE染色，镜检、封片，普通光镜下观察；用来观察细胞凋亡（TUNNEL法）。
脑细胞凋亡检测：应用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（terminal-deoxynucleotidyl transferse mediated nick end labeling，TUNNEL）检测脑组织的凋亡细胞。
统计学方法：采用SPSS11.5统计软件进行统计学处理。实验数据计数资料均以X±S表示，实验数据经方差齐性检验和t检验，组间比较采用单因素方差分析和方差齐性检验，方差齐时采用t检验，方差不齐时采用t’检验，P＜0.05为有统计学意义。
结 果
氯胺酮对颅脑损伤大鼠神经细胞凋亡的影响：在未遭受打击伤的假手术对照组中，大鼠脑组织中亦有少量TUNNEL阳性细胞表达，颅脑损伤后，在不同时间段的6、24、72小时，Tunnel凋亡细胞率缓慢增加，与假手术对照组比较，差异明显（P＜0.05）。用氯胺酮治疗24小时组、72小时组，能够使凋亡细胞数量减少，与同时间段的模型对照组比较，差异明显（P＜0.05），氯胺酮治疗6小时组与损伤对照6小时组差异不明显（P＞0.05）。见表1。
表1 氯胺酮对颅脑损伤大鼠神经细胞凋亡的影响
注：与假手术对照组比较，*P＜0.05；与损伤对照组同时段比较，【sup】△【/sup】P＜0.05
讨 论
氯胺酮颅脑损伤大鼠神经细胞细胞凋亡：细胞凋亡指细胞在一定的生理或病理条件下，遵循自身的程序，结束自己生命的过程，最后细胞脱落离体或裂解为若干凋亡小体而被其他细胞吞噬，它是机体维持自身稳定的一种基本生理机制。传统观念认为颅脑损伤后某些内源性损害因子能直接损害脑细胞，破坏血脑屏障，诱发和加重脑水腫。本实验研究结果发现脑损伤后TUNEL染色阳性细胞数持续增加，用氯胺酮治疗，6小时时效果不明显（与损伤对照组比较，P＞0.05），24、72小时时，氯胺酮能明显降低脑损伤后TUNEL染色阳性细胞率（与损伤对照组比较，P＜0.05）。提示氯胺酮可通过调节凋亡蛋白对神经系统起保护作用。
氯胺酮颅脑损伤大鼠脑部病理组织学的影响：组织病理学观察，脑损伤后出现明显的脑水肿，血管周围和细胞周围充满液体，组织呈筛网状。损伤对照24小时组与72小时组较为明显，细胞出现较多坏死，并有一些炎性细胞浸润。损伤对照6小时组和氯胺酮治疗6小时与假手术组比较，结构上没有发生非常明显改变，除了一些轻度水肿外神经元基本正常，这可能是时间较短，脑组织继发性损害较轻。氯胺酮治疗24小时组和72小时组分别与损伤对照24小时组和72小时组比较，症状明显减轻，提示氯胺酮对颅脑损伤大鼠脑组织的病理改变有一定的保护作用。
本研究表明，氯胺酮可通过调节凋亡蛋白对神经系统起保护作用；氯胺酮对脑损伤的病理学改变有一定的保护作用。
参考文献
1 Kamm K,Vanderkolk W,Lawrence C,et al.The effects of traumatic brain injury upon the concentration and expression of interleukin-1 beta and interleukin-10 in the rat［J］.Trauma,2006,60（1）:152-157.
2 Shi J,Miles DK,Orr BA,et al.Injury-induced neurogenesis in Bax-deficient mice:evidence for regulation by voltage-gated potassium channels［J］.Eur Neurosci,2007,25（12）:3499-3512.
3 沈世琴,朱京慈.雾化吸入γ-IFN对大鼠重型颅脑损伤继发肺损伤支气管肺泡灌洗液中TNF-α和IL-6水平的影［J］.创伤外科杂志,2006,8（3）:241-244.
4 Marklund N,Keck C,Hoover R,et al.Administration of monoclonal antibodies neutralizing the inflammatory mediators tumor necrosis factor alpha and interleukin-6 does not attenuate acute behavioral deficits following experimental traumatic brain injury in the rat［J］.Restor Neurol Neurosci,2005,23（1）:31-42.
5 Rink A,Fung KM,Trojanowski JQ,et al.Evidence of apoptotic cell death after experimental traumatic brain injury in the rat ［J］.Am Pathol,1995,147（6）:1575-1583.
6 杨小锋,李谷,刘伟国.严重颅脑损伤后细胞凋亡状态及相关基因Bcl-2、Bax的表达［J］.中华急诊医学杂志,2004,13（2）:100-103.
关键词 氯胺酮 凋亡细胞 颅脑损伤
材料与方法
实验分组：SD大鼠70只，适应性喂养3天后，随机分为7组，每组9只。A组（假手术对照组）；B组（颅脑损伤模型对照组，简称损伤对照组），再根据伤后时间段分为伤后6、24、72小时组；C组（颅脑损伤+氯胺酮干预组，简称氯胺酮治疗组），再根据伤后时间段分为伤后6、24、72小时组。
造模：实验采用改进的Feeney自由落体硬膜脊外撞击方法。氯胺酮治疗组在打击致伤后1小时腹腔注射氯胺酮120mg/kg，在设定的时间段取材。假手术组仅切开头皮和颅骨开窗，不用打击锤致脑损伤，术后6小时处死。
脑组织取材：取受伤部位及周围脑组织置于4%多聚甲醛中固定24～36小时，常规脱水、透明、浸蜡、石蜡包埋、连续切片（片厚5μm），一部分切片进行HE染色，镜检、封片，普通光镜下观察；用来观察细胞凋亡（TUNNEL法）。
脑细胞凋亡检测：应用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（terminal-deoxynucleotidyl transferse mediated nick end labeling，TUNNEL）检测脑组织的凋亡细胞。
统计学方法：采用SPSS11.5统计软件进行统计学处理。实验数据计数资料均以X±S表示，实验数据经方差齐性检验和t检验，组间比较采用单因素方差分析和方差齐性检验，方差齐时采用t检验，方差不齐时采用t’检验，P＜0.05为有统计学意义。
结 果
氯胺酮对颅脑损伤大鼠神经细胞凋亡的影响：在未遭受打击伤的假手术对照组中，大鼠脑组织中亦有少量TUNNEL阳性细胞表达，颅脑损伤后，在不同时间段的6、24、72小时，Tunnel凋亡细胞率缓慢增加，与假手术对照组比较，差异明显（P＜0.05）。用氯胺酮治疗24小时组、72小时组，能够使凋亡细胞数量减少，与同时间段的模型对照组比较，差异明显（P＜0.05），氯胺酮治疗6小时组与损伤对照6小时组差异不明显（P＞0.05）。见表1。
表1 氯胺酮对颅脑损伤大鼠神经细胞凋亡的影响
注：与假手术对照组比较，*P＜0.05；与损伤对照组同时段比较，【sup】△【/sup】P＜0.05
讨 论
氯胺酮颅脑损伤大鼠神经细胞细胞凋亡：细胞凋亡指细胞在一定的生理或病理条件下，遵循自身的程序，结束自己生命的过程，最后细胞脱落离体或裂解为若干凋亡小体而被其他细胞吞噬，它是机体维持自身稳定的一种基本生理机制。传统观念认为颅脑损伤后某些内源性损害因子能直接损害脑细胞，破坏血脑屏障，诱发和加重脑水腫。本实验研究结果发现脑损伤后TUNEL染色阳性细胞数持续增加，用氯胺酮治疗，6小时时效果不明显（与损伤对照组比较，P＞0.05），24、72小时时，氯胺酮能明显降低脑损伤后TUNEL染色阳性细胞率（与损伤对照组比较，P＜0.05）。提示氯胺酮可通过调节凋亡蛋白对神经系统起保护作用。
氯胺酮颅脑损伤大鼠脑部病理组织学的影响：组织病理学观察，脑损伤后出现明显的脑水肿，血管周围和细胞周围充满液体，组织呈筛网状。损伤对照24小时组与72小时组较为明显，细胞出现较多坏死，并有一些炎性细胞浸润。损伤对照6小时组和氯胺酮治疗6小时与假手术组比较，结构上没有发生非常明显改变，除了一些轻度水肿外神经元基本正常，这可能是时间较短，脑组织继发性损害较轻。氯胺酮治疗24小时组和72小时组分别与损伤对照24小时组和72小时组比较，症状明显减轻，提示氯胺酮对颅脑损伤大鼠脑组织的病理改变有一定的保护作用。
本研究表明，氯胺酮可通过调节凋亡蛋白对神经系统起保护作用；氯胺酮对脑损伤的病理学改变有一定的保护作用。
参考文献
1 Kamm K,Vanderkolk W,Lawrence C,et al.The effects of traumatic brain injury upon the concentration and expression of interleukin-1 beta and interleukin-10 in the rat［J］.Trauma,2006,60（1）:152-157.
2 Shi J,Miles DK,Orr BA,et al.Injury-induced neurogenesis in Bax-deficient mice:evidence for regulation by voltage-gated potassium channels［J］.Eur Neurosci,2007,25（12）:3499-3512.
3 沈世琴,朱京慈.雾化吸入γ-IFN对大鼠重型颅脑损伤继发肺损伤支气管肺泡灌洗液中TNF-α和IL-6水平的影［J］.创伤外科杂志,2006,8（3）:241-244.
4 Marklund N,Keck C,Hoover R,et al.Administration of monoclonal antibodies neutralizing the inflammatory mediators tumor necrosis factor alpha and interleukin-6 does not attenuate acute behavioral deficits following experimental traumatic brain injury in the rat［J］.Restor Neurol Neurosci,2005,23（1）:31-42.
5 Rink A,Fung KM,Trojanowski JQ,et al.Evidence of apoptotic cell death after experimental traumatic brain injury in the rat ［J］.Am Pathol,1995,147（6）:1575-1583.
6 杨小锋,李谷,刘伟国.严重颅脑损伤后细胞凋亡状态及相关基因Bcl-2、Bax的表达［J］.中华急诊医学杂志,2004,13（2）:100-103.