探讨结直肠癌中肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)促进结直肠癌肿瘤细胞(CRC)对5-氟尿嘧啶(5-Fu)耐药及其机制。
方法体外培养原代结直肠癌组织CAFs及普通纤维细胞(NFs)，收集肿瘤相关成纤维细胞来源上清(CAF CM)或普通纤维细胞来源上清(NF CM)与5-Fu共同处理人类结肠癌细胞株SW48，利用Hoechst33342染色观察凋亡细胞形态变化、膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)/碘化丙锭(PI)双染检测肿瘤细胞早期凋亡比例的变化，细胞计数试剂盒(CCK-8)绘制毒性曲线，Western blot法检测甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)、LC3、Beclin-1的表达水平，利用自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)检测自噬在此过程中的作用。
结果Hoechst33342染色显示，肿瘤细胞5-Fu较空白对照组及5-Fu＋CAF CM组凋亡细胞比例明显上升，Annexin V-FITC/PI双染示，3-MA组、5-Fu组、5-Fu＋CAF CM组、5-Fu＋CAF CM＋3-MA组凋亡百分比分别为(7.21±1.3)%、(35.4%±2.6)%、(19.1±0.5)%、(30.4±2.1)%，Western法检测发现5-Fu＋CAF CM组较5-Fu＋NF CM组的LC3-B上升(1.52±0.4)倍、beclin-1表达水平上升(1.76±0.3)倍，与5-Fu比较，5-Fu＋CAF CM组在各时间点细胞活性均明显上升，而5-Fu＋CAF CM＋3-MA组与5-Fu组比，细胞活力差异无统计学意义。以上结论显示CAF CM＋5-Fu组凋亡率较5-Fu组明显减少，差异有统计学意义(P＝0.000)，3-MA＋CAF CM＋5-Fu组凋亡率较CAF CM＋5-Fu组明显上升，差异有统计学意义(P＝0.008)，CAF CM＋5-Fu组较NF CM＋5-Fu组LC3-B、beclin-1表达增强，差异统计学意义(P＝0.040、0.001)。
结论肿瘤相关成纤维细胞可以减少结直肠癌对5-Fu的药物敏感性，而这一效应可能依赖保护性自噬的增强。