【摘 要】
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目的 建立冻干b型流感嗜血杆菌结合疫苗原液中游离载体蛋白含量的高效分子排阻色谱（highperformancesizeexclusionchromatography， HPSEC）检测方法，并对其进行方法学验证。方法采用HPSEC法，通过对TT对照品出峰时间的测定，对分离效果和流速的考察，建立HPSEC检测游离载体蛋白含量的方法，确认色谱条件为：色谱柱：TSKgelG3000SWXL（7.8mmI
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目的 建立冻干b型流感嗜血杆菌结合疫苗原液中游离载体蛋白含量的高效分子排阻色谱（highperformancesizeexclusionchromatography， HPSEC）检测方法，并对其进行方法学验证。方法采用HPSEC法，通过对TT对照品出峰时间的测定，对分离效果和流速的考察，建立HPSEC检测游离载体蛋白含量的方法，确认色谱条件为：色谱柱：TSKgelG3000SWXL（7.8mmI.D.×30cm，5μm）；流动相为0.85%氯化钠溶液；；进样体积100μL；检测波长280nm；柱温35℃。对该方法进行专属性、分离度、线性和范围、重复性、准确度和耐用性验证并确定该方法的定量限和检测限。结果建立的方法显示对照品TT的出峰时间为17.295min，分离度良好，确定0.5mL/min作为样品上样流速，并对该方法进行验证。该方法检测游离蛋白的专属性、分离度良好；对照品（纯化的载体蛋白破伤风类毒素tetanustoxoid，TT）在3～36μg/mL范围内，与峰面积的线性关系良好(R2＞0.998)；3批疫苗原液重复性检测游离蛋白峰面积均＜1%；加入5、10、20μg/mLTT对照品溶液的添加回收率在98%～102.5%，RSD均＜2.02%；柱温在35℃和40℃时各样品中游离蛋白含量、分离度、拖尾因子无明显差别；确定方法检测限为0.75μg/mL，定量限为2.1μg/mL。结论建立的HPSEC法灵敏度高、操作简便、准确度高，可用于冻干b型流感嗜血杆菌结合疫苗原液中游离蛋白含量的检测。
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