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摘要
[目的]了解山东地区种植花生的土壤及刚收获的花生果的霉菌污染情况。[方法]分别对山东省3个花生主产区日照、青岛和临沂种植花生的田间土壤和刚收获的花生果进行了调查研究，重点对产毒霉菌，特别是黄曲霉进行了分析。[结果] 研究表明，山东花生主产区3个地区的产毒霉菌污染情况很低，且最受世界食品安全关注的黄曲霉检出率很低，只检出3株，其中青岛检出2株，临沂检出1株，说明山东花生主产区的花生生长土壤环境很好，有利于花生安全生产的实现。[结论] 研究对于探讨花生种植地黄曲霉毒素污染以及采取预防措施具有重要意义。
关键词花生；霉菌；菌相
中图分类号S565.2文献标识码
A文章编号0517-6611（2015）23-271-03
Abstract [Objective] To study mould contamination situation of soil and harvesting peanut in Shandong Province. [Method] The soil of peanut planting field in Rizhao，Qingdao，Linyi and harvesting peanut were investigated，aflatoxin was analyzed. [Result] The study showed that，mould contamination situation of three peanut producing area in Shandong Province is low，only three strains of aflatoxin were detected，indicating that soil environment is good for peanut in Shandong Province，and is beneficial to peanut safety production. [Conclusion] The study has significance on discussion of aflatoxin contamination and control measures in peanut planting field.
Key words Peanut； Mould； Bacterial flora
花生是我国重要的食、油两用经济作物和传统的大宗出口农产品，对提高农民收入、推动农村发展和平衡我国农产品贸易逆差具有重要意义[1]。但近年来，我国出口花生频繁被欧盟、日本等国家通报黄曲霉毒素超标，黄曲霉毒素超标是目前我国花生出口中存在的主要质量问题[2]。黄曲霉菌的生长和黄曲霉毒素的产生有2个重要影响因素：温度和湿度，只要条件合适，花生在生长、收获、加工、仓储和运输等任何一个环节都可能被黄曲霉菌侵染，并有可能产生黄曲霉毒素。花生产地普查结果表明，花生存在产地黄曲霉毒素田间污染的情况，青岛部分地区在花生收获时就有部分花生被黄曲霉毒素污染[3]。
山东是全国花生的主产区，出口花生数量占全国90%以上，为了了解山东地区种植花生的土壤及刚收获的花生果的霉菌污染情况，笔者对山东省3个花生主产区：日照、青岛和临沂种植花生的田间土壤和刚收获的花生果进行了调查研究，重点对产毒霉菌，特别是黄曲霉进行了分析，对于探讨花生种植地黄曲霉毒素污染以及采取预防措施具有重要意义。
1材料与方法
1.1样品来源
在山东省日照、青岛和临沂3个市的9个地区东港、莒县中楼镇、五莲、岚山、莱西、胶州、沂水、兰山和莒南，分5个时间段，根据分层两级随机抽样方法，共采集19种土壤样品。同时，在土壤取样地取新鲜收获的花生果作为花生样品。
1.2霉菌分离方法
以无菌手段称取25 g样品，置于无菌均质袋中，加入225 ml缓冲蛋白胨水（BPW），用均质器充分均质，所得混合液即为1∶10稀释液。制备YGCD培养基平板（规格：140 mm×15 mm）备用，继续作10倍稀释，选择适宜稀释度进行检测，每稀释度每种样品3个平皿，每皿500 μl作涂布培养，28 ℃至第3、5、7天各记录一次结果，在菌落数为在30～100的稀释度选择单菌落分离之。
1.3霉菌分类鉴定
根据霉菌在培养基上的菌落特征和镜下形态作鉴定，对在原培养基上培养7 d后仍未产生孢子的菌落及未鉴定菌落转接马铃薯葡萄糖培养基，继续培养仍无孢子产生和未鉴定者划入未鉴定菌株，除曲霉和青霉属全部鉴定到种外，其他鉴定到种或属。
2结果与分析
2.13个地区黏土霉菌菌相分布情况
日照、青岛和临沂3个地区黏土中霉菌的菌相十分丰富，但是产毒霉菌相对含量较少，见表1。从2014年8月11日到9月12日，霉菌分离的菌相逐渐增多，而随后有所减少。
2.23个地区沙土霉菌菌相分布情况
日照、青岛和临沂3个地区沙土中霉菌的菌相情况与黏土相类似，随时间的变化也大致相同，见表2。总体上沙土菌相明显少于黏土。
2.33个地区黏土地花生果霉菌菌相分布情况
日照、青岛和临沂3个地区黏土产花生果霉菌菌相情况与黏土土壤类似，只是菌相比土壤要少很多，产毒霉菌也相应减少，见表3。说明花生果的霉菌污染情况比土壤要低。
2.4日照、青岛和临沂3个地区沙土地花生果霉菌菌相分布情况
日照、青岛和临沂沙土产花生果霉菌菌相情况与沙土土壤类似，只是菌相比土壤要少很多，产毒霉菌也相应减少，见表4。
2.5青岛、临沂、日照3个地区检出霉菌菌相情况
各地土壤和花生中分离出的霉菌种类相似，只是含量多少有所区别，主要有：曲霉属、青霉属和其他属，优势菌种如表5所示。 2.6青岛、临沂、日照3个地区检出产毒霉菌菌相情况
为了对产生黄曲霉毒素霉菌作进一步的研究，将国标和世界各国普遍关注的产毒霉菌检出和比率情况列出分析，见表6。
3讨论
土壤真菌是土壤微生物的重要组成部分，对土壤生态系统物质转化和能量流动具有十分重要的作用，有关土壤真菌群落的研究已有大量报道[4]。花生土壤是一个复杂的、动态的有机整体，容易受到各种自然和人为因素的影响，土壤的理化性质，生育期的不同，气候及其他因素均会引起土壤真菌的种类和数量发生变化。因此，对花生土壤真菌进行动态分析，对于探讨花生种植地黄曲霉毒素污染以及采取预防措施具有重要意义。
3.13个地区土壤霉菌菌相的分布
该研究表明，各地区不同类型的土壤中，广泛地分布着各类霉菌的代表属、种。地带不同、土质不同的土壤中，霉菌区系存在一定的差别。该研究的几种土壤霉菌检出率均为100.0%，菌相也十分丰富。3个地区的霉菌菌相略有差别，日照和青岛地区比临沂稍多一些。青岛地区胶州的菌相比莱西的要丰富，但是产毒霉菌的菌相差别不大。沙土霉菌菌相均小于黏土，这可能由于沙土比黏土的透气性和透水性都好，相对水分含量低的情况下，不利于霉菌的生长繁殖。这在其他研究中也有类似报道，多数研究表明，黏土中霉菌类型较多。
并非所有土壤霉菌都能在人工培养基上生长，而且相当一部分霉菌在人工培养基条件下不产生繁殖结构或子实体，或继代培养后丧失产孢能力，故有些土壤霉菌还不能完全分离；而且该研究还有部分霉菌种类尚待进一步鉴定[5]。因此，虽然该研究基本上明确了山东花生主产区土壤霉菌的种类和数量，但还不能完全显示其土壤真菌的多样性，还有待于深入研究。
3.23个地区花生果霉菌菌相的分布该研究对花生果霉菌菌相进行了研究，结果表明，各种土壤所产花生果的霉菌菌相均少于单纯土壤，并且产毒霉菌数也相对减少。说明花生果在土壤中并不一定感染土壤中所带的所有霉菌，并且自身可能也有一定的防御作用。一般花生直接食用的部位是花生仁，花生仁在花生壳包裹之下可以极大地减少霉菌对花生仁的侵染。此外调查结果表明，黏土产花生果菌相显著多于沙土产花生果，这个结果与土壤菌相检测结果相符。
3.33个地区霉菌菌相优势种分析
3个地区霉菌的优势菌种都是青霉，曲霉次之，其他霉菌种类繁多，比较复杂。这可能与该研究选择的分离培养基有关。不同的霉菌培养基：YGCD、孟加拉红、PDA、察氏培养基等对霉菌的不同属种的培养效果不完全相同，有的适合曲霉（如孟加拉红），有的适合青霉（如YGCD），所以该研究的研究结果不能完全代表自然界的环境状况，如要定性要做深入的研究。
3.43个地区产毒霉菌菌相分析
该研究结果表明，山东花生主产区3个地区的产毒霉菌污染情况很低，且最受世界食品安全关注的黄曲霉检出率很低，只检出3株，其中青岛检出2株，临沂检出1株，说明山东花生主产区的花生生长土壤环境很好，有利于花生安全生产的实现。但是值得注意的是，曲霉、黄曲霉菌相分布低，并不意味着花生本身就不会被黄曲霉菌侵染，更不能认定花生不会受黄曲霉毒素污染，花生在种植、收获、晾晒、加工、贮存、运输等过程中都可能遭受产毒霉菌的侵染，花生采收后的相关流程的霉菌菌相调查更加重要，更多的工作仍需进行。
该研究结果表明，山东花生在种植地中遭受黄曲霉等产毒菌的侵染概率较低，不同产地花生黄曲霉毒素污染水平可能与花生在收获、晾晒、贮存等环节有关，加强这些环节的控制有助于降低花生中黄曲霉毒素的污染。
参考文献
[1]
孙学武，王才斌.中国花生对外贸易概况及前景展望[J].山东农业科学，2013，45（11）：129-133.
[2] 胡東青，庞国兴，张治宇，等.出口花生黄曲霉毒素污染的预防和控制[J].花生学报，2011，40（1）：36-38.
[3] 庞国兴，丁雷霞，姜军，等. 青岛地区花生种植地黄曲霉毒素污染调查分析[J].检验检疫科学，2008，18（2）：64-65.
[4] 张伟，许俊杰，张天宇.土壤真菌研究进展[J].菌物研究，2005，3（2）：52-58.
[5] 刘淑霞，周平，赵兰坡.吉林黑土区玉米田土壤真菌的多样性[J].东北林业大学学报，2008，36（7）：33-37.
[目的]了解山东地区种植花生的土壤及刚收获的花生果的霉菌污染情况。[方法]分别对山东省3个花生主产区日照、青岛和临沂种植花生的田间土壤和刚收获的花生果进行了调查研究，重点对产毒霉菌，特别是黄曲霉进行了分析。[结果] 研究表明，山东花生主产区3个地区的产毒霉菌污染情况很低，且最受世界食品安全关注的黄曲霉检出率很低，只检出3株，其中青岛检出2株，临沂检出1株，说明山东花生主产区的花生生长土壤环境很好，有利于花生安全生产的实现。[结论] 研究对于探讨花生种植地黄曲霉毒素污染以及采取预防措施具有重要意义。
关键词花生；霉菌；菌相
中图分类号S565.2文献标识码
A文章编号0517-6611（2015）23-271-03
Abstract [Objective] To study mould contamination situation of soil and harvesting peanut in Shandong Province. [Method] The soil of peanut planting field in Rizhao，Qingdao，Linyi and harvesting peanut were investigated，aflatoxin was analyzed. [Result] The study showed that，mould contamination situation of three peanut producing area in Shandong Province is low，only three strains of aflatoxin were detected，indicating that soil environment is good for peanut in Shandong Province，and is beneficial to peanut safety production. [Conclusion] The study has significance on discussion of aflatoxin contamination and control measures in peanut planting field.
Key words Peanut； Mould； Bacterial flora
花生是我国重要的食、油两用经济作物和传统的大宗出口农产品，对提高农民收入、推动农村发展和平衡我国农产品贸易逆差具有重要意义[1]。但近年来，我国出口花生频繁被欧盟、日本等国家通报黄曲霉毒素超标，黄曲霉毒素超标是目前我国花生出口中存在的主要质量问题[2]。黄曲霉菌的生长和黄曲霉毒素的产生有2个重要影响因素：温度和湿度，只要条件合适，花生在生长、收获、加工、仓储和运输等任何一个环节都可能被黄曲霉菌侵染，并有可能产生黄曲霉毒素。花生产地普查结果表明，花生存在产地黄曲霉毒素田间污染的情况，青岛部分地区在花生收获时就有部分花生被黄曲霉毒素污染[3]。
山东是全国花生的主产区，出口花生数量占全国90%以上，为了了解山东地区种植花生的土壤及刚收获的花生果的霉菌污染情况，笔者对山东省3个花生主产区：日照、青岛和临沂种植花生的田间土壤和刚收获的花生果进行了调查研究，重点对产毒霉菌，特别是黄曲霉进行了分析，对于探讨花生种植地黄曲霉毒素污染以及采取预防措施具有重要意义。
1材料与方法
1.1样品来源
在山东省日照、青岛和临沂3个市的9个地区东港、莒县中楼镇、五莲、岚山、莱西、胶州、沂水、兰山和莒南，分5个时间段，根据分层两级随机抽样方法，共采集19种土壤样品。同时，在土壤取样地取新鲜收获的花生果作为花生样品。
1.2霉菌分离方法
以无菌手段称取25 g样品，置于无菌均质袋中，加入225 ml缓冲蛋白胨水（BPW），用均质器充分均质，所得混合液即为1∶10稀释液。制备YGCD培养基平板（规格：140 mm×15 mm）备用，继续作10倍稀释，选择适宜稀释度进行检测，每稀释度每种样品3个平皿，每皿500 μl作涂布培养，28 ℃至第3、5、7天各记录一次结果，在菌落数为在30～100的稀释度选择单菌落分离之。
1.3霉菌分类鉴定
根据霉菌在培养基上的菌落特征和镜下形态作鉴定，对在原培养基上培养7 d后仍未产生孢子的菌落及未鉴定菌落转接马铃薯葡萄糖培养基，继续培养仍无孢子产生和未鉴定者划入未鉴定菌株，除曲霉和青霉属全部鉴定到种外，其他鉴定到种或属。
2结果与分析
2.13个地区黏土霉菌菌相分布情况
日照、青岛和临沂3个地区黏土中霉菌的菌相十分丰富，但是产毒霉菌相对含量较少，见表1。从2014年8月11日到9月12日，霉菌分离的菌相逐渐增多，而随后有所减少。
2.23个地区沙土霉菌菌相分布情况
日照、青岛和临沂3个地区沙土中霉菌的菌相情况与黏土相类似，随时间的变化也大致相同，见表2。总体上沙土菌相明显少于黏土。
2.33个地区黏土地花生果霉菌菌相分布情况
日照、青岛和临沂3个地区黏土产花生果霉菌菌相情况与黏土土壤类似，只是菌相比土壤要少很多，产毒霉菌也相应减少，见表3。说明花生果的霉菌污染情况比土壤要低。
2.4日照、青岛和临沂3个地区沙土地花生果霉菌菌相分布情况
日照、青岛和临沂沙土产花生果霉菌菌相情况与沙土土壤类似，只是菌相比土壤要少很多，产毒霉菌也相应减少，见表4。
2.5青岛、临沂、日照3个地区检出霉菌菌相情况
各地土壤和花生中分离出的霉菌种类相似，只是含量多少有所区别，主要有：曲霉属、青霉属和其他属，优势菌种如表5所示。 2.6青岛、临沂、日照3个地区检出产毒霉菌菌相情况
为了对产生黄曲霉毒素霉菌作进一步的研究，将国标和世界各国普遍关注的产毒霉菌检出和比率情况列出分析，见表6。
3讨论
土壤真菌是土壤微生物的重要组成部分，对土壤生态系统物质转化和能量流动具有十分重要的作用，有关土壤真菌群落的研究已有大量报道[4]。花生土壤是一个复杂的、动态的有机整体，容易受到各种自然和人为因素的影响，土壤的理化性质，生育期的不同，气候及其他因素均会引起土壤真菌的种类和数量发生变化。因此，对花生土壤真菌进行动态分析，对于探讨花生种植地黄曲霉毒素污染以及采取预防措施具有重要意义。
3.13个地区土壤霉菌菌相的分布
该研究表明，各地区不同类型的土壤中，广泛地分布着各类霉菌的代表属、种。地带不同、土质不同的土壤中，霉菌区系存在一定的差别。该研究的几种土壤霉菌检出率均为100.0%，菌相也十分丰富。3个地区的霉菌菌相略有差别，日照和青岛地区比临沂稍多一些。青岛地区胶州的菌相比莱西的要丰富，但是产毒霉菌的菌相差别不大。沙土霉菌菌相均小于黏土，这可能由于沙土比黏土的透气性和透水性都好，相对水分含量低的情况下，不利于霉菌的生长繁殖。这在其他研究中也有类似报道，多数研究表明，黏土中霉菌类型较多。
并非所有土壤霉菌都能在人工培养基上生长，而且相当一部分霉菌在人工培养基条件下不产生繁殖结构或子实体，或继代培养后丧失产孢能力，故有些土壤霉菌还不能完全分离；而且该研究还有部分霉菌种类尚待进一步鉴定[5]。因此，虽然该研究基本上明确了山东花生主产区土壤霉菌的种类和数量，但还不能完全显示其土壤真菌的多样性，还有待于深入研究。
3.23个地区花生果霉菌菌相的分布该研究对花生果霉菌菌相进行了研究，结果表明，各种土壤所产花生果的霉菌菌相均少于单纯土壤，并且产毒霉菌数也相对减少。说明花生果在土壤中并不一定感染土壤中所带的所有霉菌，并且自身可能也有一定的防御作用。一般花生直接食用的部位是花生仁，花生仁在花生壳包裹之下可以极大地减少霉菌对花生仁的侵染。此外调查结果表明，黏土产花生果菌相显著多于沙土产花生果，这个结果与土壤菌相检测结果相符。
3.33个地区霉菌菌相优势种分析
3个地区霉菌的优势菌种都是青霉，曲霉次之，其他霉菌种类繁多，比较复杂。这可能与该研究选择的分离培养基有关。不同的霉菌培养基：YGCD、孟加拉红、PDA、察氏培养基等对霉菌的不同属种的培养效果不完全相同，有的适合曲霉（如孟加拉红），有的适合青霉（如YGCD），所以该研究的研究结果不能完全代表自然界的环境状况，如要定性要做深入的研究。
3.43个地区产毒霉菌菌相分析
该研究结果表明，山东花生主产区3个地区的产毒霉菌污染情况很低，且最受世界食品安全关注的黄曲霉检出率很低，只检出3株，其中青岛检出2株，临沂检出1株，说明山东花生主产区的花生生长土壤环境很好，有利于花生安全生产的实现。但是值得注意的是，曲霉、黄曲霉菌相分布低，并不意味着花生本身就不会被黄曲霉菌侵染，更不能认定花生不会受黄曲霉毒素污染，花生在种植、收获、晾晒、加工、贮存、运输等过程中都可能遭受产毒霉菌的侵染，花生采收后的相关流程的霉菌菌相调查更加重要，更多的工作仍需进行。
该研究结果表明，山东花生在种植地中遭受黄曲霉等产毒菌的侵染概率较低，不同产地花生黄曲霉毒素污染水平可能与花生在收获、晾晒、贮存等环节有关，加强这些环节的控制有助于降低花生中黄曲霉毒素的污染。
参考文献
[1]
孙学武，王才斌.中国花生对外贸易概况及前景展望[J].山东农业科学，2013，45（11）：129-133.
[2] 胡東青，庞国兴，张治宇，等.出口花生黄曲霉毒素污染的预防和控制[J].花生学报，2011，40（1）：36-38.
[3] 庞国兴，丁雷霞，姜军，等. 青岛地区花生种植地黄曲霉毒素污染调查分析[J].检验检疫科学，2008，18（2）：64-65.
[4] 张伟，许俊杰，张天宇.土壤真菌研究进展[J].菌物研究，2005，3（2）：52-58.
[5] 刘淑霞，周平，赵兰坡.吉林黑土区玉米田土壤真菌的多样性[J].东北林业大学学报，2008，36（7）：33-37.