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摘要：为研究纳豆芽孢杆菌对黄鳝生长的影响，在饲料中添加不同含量的纳豆芽孢杆菌进行养殖试验。结果表明，饲料中添加纳豆芽孢杆菌，可以提高黄鳝的增重率和特定生长率，随着纳豆芽孢杆菌含量的增加，消化酶活性也有增大的趋势，在纳豆菌添加量达到0.4%时，该组黄鳝肠道的蛋白酶活性显著高于对照组的（P<0.05）。因此，饲料中添加纳豆芽孢杆菌，可以在一定程度上提高黄鳝的消化酶活性，促进黄鳝生长。
关键词：纳豆芽孢杆菌;黄鳝;生长性能
Abstract：In order to study the effect of bacillus natto on the growth of eel，different contents of bacillus natto were added into the feed.The results showed that adding bacillus canna into the feed could improve the weight gain rate and specific growth rate of eel，and the digestive enzyme activity also increased with the increase of bacillus canna content.When bacillus natto content reached 0.4%，the intestinal protease activity of eel in this group was significantly higher than that in the control group （P<0.05）.Adding bacillus canna into the feed can improve the digestive enzyme activity of eel to some extent and promote the growth of eel.
Key words：Bacillus natto;Rice field eel;Growth performance
黄鳝（Monopterus albus Zuiew）是我国重要的淡水经济鱼类之一，其肉厚刺少、营养丰富、风味独特，不仅是老少皆宜的佳肴美食，而且具有良好的药用和保健功能。经过几十年来的发展，我国黄鳝的养殖规模不断扩大，养殖产量逐年上升，2016年全国黄鳝养殖的总产量达38.61万t[1]。然而，随着黄鳝养殖规模的不断扩大，病害的发生也日趋严重，这在一定程度上制约了黄鳝养殖业的健康持续发展[2]。
纳豆芽孢杆菌通过分泌有机酸、细菌素等抗菌物质来抑制致病菌的生长，调节肠道菌群，进而增强肠道的吸收功能[3-4]。除此以外，纳豆芽孢杆菌还可分解饲料中的蛋白质、碳水化合物、脂肪等大分子物质，也可使发酵产物中富含氨基酸、有机酸、寡聚糖等多种易被动物消化吸收的养分，其自身代谢也能分泌出多种消化酶和维生素，从而促进小肠黏膜细胞的增殖，保证正常的肠道功能[5]。
近几年来，纳豆芽孢杆菌常被作为饲料添加剂，用于动物免疫方面的研究[6-8]已有不少报道，但其对鱼类生长的影响的报道相对较少，针对黄鳝的研究则几乎为空白。为此，笔者开展了饲料中添加不同量的纳豆芽孢杆菌对黄鳝生长的影响研究，为今后黄鳝的生态养殖提供理论基础。
1 材料与方法
1.1 供试材料 本试验所用黄鳝来源于崇明當地捕捞，均选取体格健壮、无病无伤的个体。选取平均初始体重为（18.50±0.29）g的黄鳝作为试验对象。
1.2 试验设计 以饲料中不添加纳豆菌为对照组S0，在饲料中分别添加0.1%、0.2%、0.4%纳豆芽孢杆菌作为试验组S1、S2、S3。每个网箱（2m×1.5m×1m）共放养50尾，3次重复。
1.3 饲养管理 本试验在上海春润水产养殖合作社稻田环沟中进行，稻田水质良好，无污染，水源充足。试验用黄鳝以聚维酮碘消毒后暂养24h，并选出健康状况不佳的黄鳝。试验用聚乙烯网箱规格为2m×1m×1.5m，使用前用20mg/L高锰酸钾浸泡消毒。将网箱固定在环沟水体，网箱间距约为3m。在放养前15d向网箱中投放水花生，覆盖面积达到2/3左右为宜。网箱中投放黄鳝2d后，以蚯蚓和鲜鱼浆开始投饵驯化，之后逐渐以黄鳝专用膨化饲料（蛋白含量42%）完全替代。每日投喂1次，投喂时间为18∶00—19∶00，投喂量以鱼体重的3%～5%左右为宜，雨天停止投喂，阴天酌情减量。养殖试验持续90d。
1.4 样品采集和指标测定 试验结束后，饥饿24h。统计每网箱的存活的黄鳝尾数，并称量每个网箱的总体重，每个重复随机选取10尾黄鳝分别测体重，分离内脏并称重，计算脏体比。
生长情况测量后每网箱取10尾黄鳝，麻醉后用酒精消毒，于消毒后的瓷盘上迅速解剖，剪下肠道，用镊子轻轻去掉肠周围的脂肪，以1∶4的比例加入蒸馏水，将组织于冰浴中匀浆，离心，收集上清液于24h内完成测定。肠胰蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶的测定采用南京建成生物工程研究所的试剂盒测定。
1.5 数据分析 数据先用Excel 2010统计整理，然后采用SPSS 19.0 软件进行One-Way ANOVA方差分析，当差异显著时（P<0.05），采用Duncans法进行多重比较，分析结果用平均值±标准误表示。
2 结果与分析
经过90d的养殖试验后，饲料中添加纳豆芽孢杆菌对黄鳝生长的影响，测定结果见表1。由表1可知，添加纳豆菌的的组别增重率均高于对照组，并且伴随着的纳豆菌量的提高呈现增高的趋势，但组间无显著性差异（P>0.05）。各试验组和对照组相比特定生长率差异不大（P<0.05）。 消化酶的测定结果见表2，由表2可见，随着饲料中芽孢杆菌量的增加黄鳝体内蛋白酶的活性随之增大，且S3组显著高于对照组，淀粉酶与脂肪酶与饲料中芽孢杆菌的添加量呈现正相关，但差异不显著（P>0.05）。
3 讨论与结论
近年来，众多学者利用益生菌对石斑鱼[9]、黄河鲤[10]、大菱鲆[11]、大西洋鲑[12]、乌鳢[13]等鱼类进行了大量研究，结果表明，复合益生菌对鱼体生长性能的提升有较为显著的效果。
纳豆芽孢杆菌作为益生菌的一种，本身含有营养物质，其在生长繁殖过程中，能够分解饲料中的大分子物质，使其成为更易被吸收的小分子成分，同时能够产生纳豆激酶等多种生理活性成分[14]，从而为黄鳝提供更为全面的营养，并增强动物对食物的消化和吸收。本次实验结果显示，添加纳豆芽孢杆菌后可以在一定程度上提升黄鳝的特定生长率，对增养率有明显的促进效果，这与沈斌乾等饲料中添加枯草芽孢杆菌可以有效提高青鱼生长速度，降低饲料系數的结果相似[15]。说明饲料中添加一定量的纳豆芽孢杆菌，可以有效提升黄鳝的生长性能。
益生菌的促生长机理包含多个方面，其中一个重要方面是其本身能够分泌多种消化酶，并能够促进肠道中其他益生菌的繁殖，从而间接促进消化酶的分泌，增强营养物质的消化吸收[16-17]。
对消化酶的测定结果显示，饲料中纳豆芽孢杆菌的添加量与消化酶的活性呈正相关。当添加量达到0.4%时，蛋白酶活性显著高于对照组，其原因在于纳豆芽孢杆菌分泌的消化酶使黄鳝对摄入食物的消化吸收加快，从而提高了黄鳝的摄食率。鱼体为了适应摄食量的增加，对消化机能进行适应性改变，促使肝脏中消化酶的合成水平适应性升高[18]。这可能因为黄鳝属于偏肉食性的杂食鱼类，饥饿状态下对蛋白质的需求更为迫切，导致其蛋白酶的活性要远高于其他消化酶。本试验表明，在低添加量的状态下，纳豆芽孢杆菌可以有效提升黄鳝消化酶的活性，该结论与胡亚军等[19]添加0.2%复合益生菌黄鳝胰蛋白酶活性显著提高（P<0.05）研究结论一致。
综上所述，饲料中添加纳豆芽孢杆菌可以在一定程度上提高黄鳝的消化酶活性，促进黄鳝生长。从生长效果来看，以在饲料中添加0.4%的纳豆芽孢杆菌较为适宜。
参考文献
[1]农业部渔业渔政管理局.中国渔业统计年鉴[M].北京：中国农业出版社，2017.
[2]温周瑞.黄鳝主要病害及其防控技术研究进展[J].湖北农业科学，2018，57（14）：10-14.
[3]黄剑飞，李健，刘淇，等.纳豆芽孢杆菌对健康和鳗弧菌感染牙鲆肠黏液黏附的研究[J].安徽农业科学，2008，36（7）：2779-2781.
[4]尹惠霖，李宗军.纳豆芽孢杆菌对肠道功能的影响研究进展[J].农产品加工（学刊），2014（12）：50-51，56.
[5]吉美萍，肖志婷，那日，等.纳豆芽孢杆菌的相关研究进展[J].河南师范大学学报（自然科学版），2016，44（05）：83-93.
[6]唐荣.纳豆芽孢杆菌BN06对小鼠免疫功能的影响[A]//中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第五届第十三次全国学术研讨会论文集[C].2018.
[7]吴高峰，黄占旺，刘宛玲，等.纳豆菌制剂对抗生素介导小鼠的免疫调节作用及细胞因子分泌的影响[J].中国食品学报，2018，18（02）：22-29.
[8]沈柱英，黄占旺，曹靖文.纳豆菌糖肽对免疫功能低下小鼠的免疫调节作用[J].营养学报，2014，36（04）：361-365.
[9]李小梅，杨丽冬，张家学，等.一种复合益生菌对斜带石斑鱼生长及免疫特性影响的研究[J].饲料工业，2015（02）
[10]谢炎福，代春梅，杜亚.益生菌发酵复方中药对黄河鲤生长性能和免疫性能的影响[J].黑龙江畜牧兽医，2015（15）：198-200.
[11]暴宁，司滨，王连顺，等.复合益生菌对大菱鲆生长指标、血液生理生化指标的影响[J].河北渔业，2017（04）：5-10，13.
[12]刘淑兰，陈娟，李杰，等.复合益生菌制剂对大西洋鲑（Salmo salar）生长、消化酶和非特异性免疫指标的影响[J].渔业科学进展，2017（05）.
[13]杨虹，谢明宝，于辉，等.2种微生态制剂对乌鳢生长性能、肠道形态及免疫功能的影响[J].河南农业科学，2019，48（01）：134-140.
[14]李梦丹，谢艳华，陈力力，等.纳豆芽孢杆菌及其在食品生产中的应用研究进展[J].食品安全质量检测学报，2016，7（08）：3209-3215.
[15]沈斌乾，陈建明，郭建林，等.饲料中添加枯草芽孢杆菌对青鱼生长、消化酶活性和鱼体组成的影响[J].水生生物学报，2013（01）.
[16]李华文，刘建华.饲用芽孢杆菌的生物学功能及其在水产养殖中的应用[J].饲料与畜牧，2013（12）.
[17]李桂英，孙艳，宋晓玲，等.饲料中添加潜在益生菌对凡纳滨对虾肠道消化酶活性和菌群组成的影响[J].渔业科学进展，2013（04）.
[18]Liane Stumpf，Carolina Tropea，Laura S.López Greco.Recovery growth of Cherax quadricarinatus juveniles fed on two high-protein diets：Effect of daily feeding following a cyclic feeding period on growth，biochemical composition and activity of digestive enzymes[J].Aquaculture，2014，433.
[19]胡亚军，李昭林，田芊芊，等.饲料中添加复合益生菌对黄鳝生长、消化酶活性、部分血清生理生化指标以及体成分的影响[J].中国饲料，2016（17）：27-31. （责编：张宏民）
关键词：纳豆芽孢杆菌;黄鳝;生长性能
Abstract：In order to study the effect of bacillus natto on the growth of eel，different contents of bacillus natto were added into the feed.The results showed that adding bacillus canna into the feed could improve the weight gain rate and specific growth rate of eel，and the digestive enzyme activity also increased with the increase of bacillus canna content.When bacillus natto content reached 0.4%，the intestinal protease activity of eel in this group was significantly higher than that in the control group （P<0.05）.Adding bacillus canna into the feed can improve the digestive enzyme activity of eel to some extent and promote the growth of eel.
Key words：Bacillus natto;Rice field eel;Growth performance
黄鳝（Monopterus albus Zuiew）是我国重要的淡水经济鱼类之一，其肉厚刺少、营养丰富、风味独特，不仅是老少皆宜的佳肴美食，而且具有良好的药用和保健功能。经过几十年来的发展，我国黄鳝的养殖规模不断扩大，养殖产量逐年上升，2016年全国黄鳝养殖的总产量达38.61万t[1]。然而，随着黄鳝养殖规模的不断扩大，病害的发生也日趋严重，这在一定程度上制约了黄鳝养殖业的健康持续发展[2]。
纳豆芽孢杆菌通过分泌有机酸、细菌素等抗菌物质来抑制致病菌的生长，调节肠道菌群，进而增强肠道的吸收功能[3-4]。除此以外，纳豆芽孢杆菌还可分解饲料中的蛋白质、碳水化合物、脂肪等大分子物质，也可使发酵产物中富含氨基酸、有机酸、寡聚糖等多种易被动物消化吸收的养分，其自身代谢也能分泌出多种消化酶和维生素，从而促进小肠黏膜细胞的增殖，保证正常的肠道功能[5]。
近几年来，纳豆芽孢杆菌常被作为饲料添加剂，用于动物免疫方面的研究[6-8]已有不少报道，但其对鱼类生长的影响的报道相对较少，针对黄鳝的研究则几乎为空白。为此，笔者开展了饲料中添加不同量的纳豆芽孢杆菌对黄鳝生长的影响研究，为今后黄鳝的生态养殖提供理论基础。
1 材料与方法
1.1 供试材料 本试验所用黄鳝来源于崇明當地捕捞，均选取体格健壮、无病无伤的个体。选取平均初始体重为（18.50±0.29）g的黄鳝作为试验对象。
1.2 试验设计 以饲料中不添加纳豆菌为对照组S0，在饲料中分别添加0.1%、0.2%、0.4%纳豆芽孢杆菌作为试验组S1、S2、S3。每个网箱（2m×1.5m×1m）共放养50尾，3次重复。
1.3 饲养管理 本试验在上海春润水产养殖合作社稻田环沟中进行，稻田水质良好，无污染，水源充足。试验用黄鳝以聚维酮碘消毒后暂养24h，并选出健康状况不佳的黄鳝。试验用聚乙烯网箱规格为2m×1m×1.5m，使用前用20mg/L高锰酸钾浸泡消毒。将网箱固定在环沟水体，网箱间距约为3m。在放养前15d向网箱中投放水花生，覆盖面积达到2/3左右为宜。网箱中投放黄鳝2d后，以蚯蚓和鲜鱼浆开始投饵驯化，之后逐渐以黄鳝专用膨化饲料（蛋白含量42%）完全替代。每日投喂1次，投喂时间为18∶00—19∶00，投喂量以鱼体重的3%～5%左右为宜，雨天停止投喂，阴天酌情减量。养殖试验持续90d。
1.4 样品采集和指标测定 试验结束后，饥饿24h。统计每网箱的存活的黄鳝尾数，并称量每个网箱的总体重，每个重复随机选取10尾黄鳝分别测体重，分离内脏并称重，计算脏体比。
生长情况测量后每网箱取10尾黄鳝，麻醉后用酒精消毒，于消毒后的瓷盘上迅速解剖，剪下肠道，用镊子轻轻去掉肠周围的脂肪，以1∶4的比例加入蒸馏水，将组织于冰浴中匀浆，离心，收集上清液于24h内完成测定。肠胰蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶的测定采用南京建成生物工程研究所的试剂盒测定。
1.5 数据分析 数据先用Excel 2010统计整理，然后采用SPSS 19.0 软件进行One-Way ANOVA方差分析，当差异显著时（P<0.05），采用Duncans法进行多重比较，分析结果用平均值±标准误表示。
2 结果与分析
经过90d的养殖试验后，饲料中添加纳豆芽孢杆菌对黄鳝生长的影响，测定结果见表1。由表1可知，添加纳豆菌的的组别增重率均高于对照组，并且伴随着的纳豆菌量的提高呈现增高的趋势，但组间无显著性差异（P>0.05）。各试验组和对照组相比特定生长率差异不大（P<0.05）。 消化酶的测定结果见表2，由表2可见，随着饲料中芽孢杆菌量的增加黄鳝体内蛋白酶的活性随之增大，且S3组显著高于对照组，淀粉酶与脂肪酶与饲料中芽孢杆菌的添加量呈现正相关，但差异不显著（P>0.05）。
3 讨论与结论
近年来，众多学者利用益生菌对石斑鱼[9]、黄河鲤[10]、大菱鲆[11]、大西洋鲑[12]、乌鳢[13]等鱼类进行了大量研究，结果表明，复合益生菌对鱼体生长性能的提升有较为显著的效果。
纳豆芽孢杆菌作为益生菌的一种，本身含有营养物质，其在生长繁殖过程中，能够分解饲料中的大分子物质，使其成为更易被吸收的小分子成分，同时能够产生纳豆激酶等多种生理活性成分[14]，从而为黄鳝提供更为全面的营养，并增强动物对食物的消化和吸收。本次实验结果显示，添加纳豆芽孢杆菌后可以在一定程度上提升黄鳝的特定生长率，对增养率有明显的促进效果，这与沈斌乾等饲料中添加枯草芽孢杆菌可以有效提高青鱼生长速度，降低饲料系數的结果相似[15]。说明饲料中添加一定量的纳豆芽孢杆菌，可以有效提升黄鳝的生长性能。
益生菌的促生长机理包含多个方面，其中一个重要方面是其本身能够分泌多种消化酶，并能够促进肠道中其他益生菌的繁殖，从而间接促进消化酶的分泌，增强营养物质的消化吸收[16-17]。
对消化酶的测定结果显示，饲料中纳豆芽孢杆菌的添加量与消化酶的活性呈正相关。当添加量达到0.4%时，蛋白酶活性显著高于对照组，其原因在于纳豆芽孢杆菌分泌的消化酶使黄鳝对摄入食物的消化吸收加快，从而提高了黄鳝的摄食率。鱼体为了适应摄食量的增加，对消化机能进行适应性改变，促使肝脏中消化酶的合成水平适应性升高[18]。这可能因为黄鳝属于偏肉食性的杂食鱼类，饥饿状态下对蛋白质的需求更为迫切，导致其蛋白酶的活性要远高于其他消化酶。本试验表明，在低添加量的状态下，纳豆芽孢杆菌可以有效提升黄鳝消化酶的活性，该结论与胡亚军等[19]添加0.2%复合益生菌黄鳝胰蛋白酶活性显著提高（P<0.05）研究结论一致。
综上所述，饲料中添加纳豆芽孢杆菌可以在一定程度上提高黄鳝的消化酶活性，促进黄鳝生长。从生长效果来看，以在饲料中添加0.4%的纳豆芽孢杆菌较为适宜。
参考文献
[1]农业部渔业渔政管理局.中国渔业统计年鉴[M].北京：中国农业出版社，2017.
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[5]吉美萍，肖志婷，那日，等.纳豆芽孢杆菌的相关研究进展[J].河南师范大学学报（自然科学版），2016，44（05）：83-93.
[6]唐荣.纳豆芽孢杆菌BN06对小鼠免疫功能的影响[A]//中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第五届第十三次全国学术研讨会论文集[C].2018.
[7]吴高峰，黄占旺，刘宛玲，等.纳豆菌制剂对抗生素介导小鼠的免疫调节作用及细胞因子分泌的影响[J].中国食品学报，2018，18（02）：22-29.
[8]沈柱英，黄占旺，曹靖文.纳豆菌糖肽对免疫功能低下小鼠的免疫调节作用[J].营养学报，2014，36（04）：361-365.
[9]李小梅，杨丽冬，张家学，等.一种复合益生菌对斜带石斑鱼生长及免疫特性影响的研究[J].饲料工业，2015（02）
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[11]暴宁，司滨，王连顺，等.复合益生菌对大菱鲆生长指标、血液生理生化指标的影响[J].河北渔业，2017（04）：5-10，13.
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[14]李梦丹，谢艳华，陈力力，等.纳豆芽孢杆菌及其在食品生产中的应用研究进展[J].食品安全质量检测学报，2016，7（08）：3209-3215.
[15]沈斌乾，陈建明，郭建林，等.饲料中添加枯草芽孢杆菌对青鱼生长、消化酶活性和鱼体组成的影响[J].水生生物学报，2013（01）.
[16]李华文，刘建华.饲用芽孢杆菌的生物学功能及其在水产养殖中的应用[J].饲料与畜牧，2013（12）.
[17]李桂英，孙艳，宋晓玲，等.饲料中添加潜在益生菌对凡纳滨对虾肠道消化酶活性和菌群组成的影响[J].渔业科学进展，2013（04）.
[18]Liane Stumpf，Carolina Tropea，Laura S.López Greco.Recovery growth of Cherax quadricarinatus juveniles fed on two high-protein diets：Effect of daily feeding following a cyclic feeding period on growth，biochemical composition and activity of digestive enzymes[J].Aquaculture，2014，433.
[19]胡亚军，李昭林，田芊芊，等.饲料中添加复合益生菌对黄鳝生长、消化酶活性、部分血清生理生化指标以及体成分的影响[J].中国饲料，2016（17）：27-31. （责编：张宏民）