目的:建立同时测定动物组织中克伦特罗(clenbuterol,CLB)和莱克多巴胺(ractopamine,RAC)的纳米均相时间分辨荧光免疫(amplified luminescent proximity homogeneous assay linked immunosorbent assay,AlphaLISA)分析方法。方法:样品经β-葡萄糖醛酸苷酶/芳基硫酯酶和乙酸铵酶解提取,正己烷脱脂,滤膜过滤,滤液与生物素化抗原、抗体、供体微珠和受体微珠进行酶联免疫,AlphaLISA进行检测。结果:CLB和RAC在0.1~50 ng/mL范围内呈良好的线性关系(R2>0.98),检测限为0.02 ng/mL;在5、10、20μg/kg 3个添加水平下CLB+RAC(1∶1)、CLB和RAC的回收率分别为88.8%~102.8%、86.6%~98.3%和84.2%~103.2%;相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)均小于12%。结论:该方法快速简单、结果准确可靠,适用于检测和筛选动物组织中的RAC和CLB。