保护剂对大肠杆菌重组NAD激酶热稳定性的影响

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为了提高烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)激酶的稳定性,研究了几种糖类(葡萄糖、麦芽糖、蔗糖)、醇类(甘油、乙醇、山梨醇)和表面活性剂类(吐温20和司盘20)对NAD激酶热稳定性的影响,通过正交实验得到了一种复合保护剂,并研究了复合保护剂对NAD激酶热稳定性、最适反应温度、p H及储存稳定性的影响。结果表明:麦芽糖、甘油、乙醇、吐温20均能显著提高NAD激酶热稳定性。复合保护剂配方为w(麦芽糖)=0.6%、φ(甘油)=8%、φ(乙醇)=8%、φ(吐温20)=0.6%。55℃时,添加复合保护剂后,NAD激酶半衰期由1.1 h提高到18.4 h,提高了16.7倍;最适反应温度由35℃提高到50℃;p H稳定范围由6.09.0扩大到5.59.5;在4℃储存28 d后,酶活保留率提高31%。
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