水稻共生菌DX01的分子鉴定及电击转化条件的初步探索

来源 :复旦学报(自然科学版) | 被引量 : 0次 | 上传用户:zr0156268
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用PCR的方法扩增了水稻表面共生菌DX0 1的 16SrDNA片段 ,并进行了部分序列的测定和BLAST同源序列比较分析 ,结果表明 ,该序列 3′端 5 5 0bp与短小芽孢杆菌 (Bacilluspumilus) 16SrDNA的同源性达 99% ,5′端 6 80bp为 98% ,故DX0 1应为B .pumilus.对其电击法转化的部分条件进行了初步的探索 ,结果表明 :当细菌处于D(6 0 0 )为 0 9的生长期时 ,使用PEB作为电击缓冲液 ,对 2 0 0 μL体积的细胞悬液在电容 2 5 μF ,电阻2 0 0Ω ,电压 1 9kV的电击条件进行完整质粒转化可得到较高的转化率 . The 16S rDNA fragment of commensal strain DX0 1 on rice surface was amplified by PCR and the partial sequence analysis and BLAST analysis of the homologous sequences were performed. The results showed that the 5 ’0 bp of 3’ end of this sequence was identical to that of Bacillus pumilus The homology of 16S rDNA was 99%, and the 6 80 bp of 5 ’end was 98%. Therefore, DX0 1 should be B.pumilus. Some conditions of electroporation transformation were explored. The results showed that when bacteria were in D (6 0 0) is 0 9, whole cell transformation is carried out on a cell suspension with a volume of 250 μL, a resistance of 200 Ω and a voltage of 19 kV using PEB as an electric shock buffer Get a higher conversion rate.
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