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摘要：目的 建立气相色谱顶空进样法检测氟胞嘧啶中的残留溶剂1，2二氯苯和N,N二甲基苯胺 方法 顶空进样瓶体积20ml，进样量6ul，样品定量环体积1ml，平衡温度90℃，定量环温度100℃，传输线温度110℃，平衡时间10min，检测周期25min。结果1，2二氯苯和N,N二甲基苯胺的分离度为9.41；1，2-二氯苯峰面积的重复性为RSD=0.87%，N,N二甲基苯胺的峰面积重复性为RSD=1.66%；1，2-二氯苯峰面积的中间精密度RSD=0.28%，N，N-二甲基苯胺峰面积中间精密度RSD=1.53%；1，2二氯苯的线性关系为y=13.347x-0.2557r=0.9997，N,N二甲基苯胺的线性关系y=20.221x-0.0335 r=0.9998；1，2二氯苯的回收率为100.54%-101.15%，N,N二甲基苯胺的回收率为99.86%-100.60%； 1，2-二氯苯的检测限为0.05909ug/ml，N，N-二甲基苯胺的检测限为0.03105ug/ml；1，2-二氯苯的定量限为0.2056ug/ml，N，N-二甲基苯胺的定量限为0.1548ug/ml；方法具备一定耐用性。结论 本方法分离度良好，准确度高，有很好的线性、检测限和定量限。
关键词 顶空进样法 氟胞嘧啶 残留溶剂
氟胞嘧啶化学名为4-氨基-5-氟-2(1H)-嘧啶酮，是一種抗真菌药，用于治疗白念球菌和隐球菌等感染。根据我公司氟胞嘧啶的工艺，产品氟胞嘧啶中的主要残留溶剂是1，2-二氯苯和N，N-二甲基苯胺，1，2-二氯苯的内控标准为50 ppm, N，N-二甲基苯胺的内控标准为5ppm,对残留溶剂1，2-二氯苯和N，N-二甲基苯胺的测试，现采用气相色谱顶空进样方法，有效地控制产品中的这两种残留溶剂，达到了满意的效果。
仪器与试药
安捷伦7890A气相色谱仪G1888顶空进样器 安捷伦Chemstation 色谱软件DB-624(30m×0.53mm×3.0um)石英毛细管柱及氢火焰离子化检测器 氟胞嘧啶工作标准品（FLC2010001S，本公司自制）1，2-二氯苯、N，N-二甲基苯胺和乙醇为色谱纯。
方法与结果
2.1【1】色谱条件
氮气作载气，柱流速4ml/min，进样器温度160℃，柱温150℃，检测器温度280℃，分流比：20：1，空气流速380ml/min，氢气流速30ml/min，尾吹+恒定柱流50ml/min。顶空进样瓶体积20ml，进样量6ul，样品定量环体积1ml，平衡温度90℃，定量环温度100℃，传输线温度110℃，平衡时间10min，加压时间0.08min，定量环填充时间0.05min，定量环平衡时间0.05min，进梯时间1.00min，检测周期25min。
2.2【1】样品和对照制备
2.2.1对照品溶液的制备（a）精确称取1，2-二氯苯0.0587克加入内有少量无水乙醇的100ml容量瓶中，用无水乙醇定容，即得标准贮备液（a）。
（b）精确称取N，N-二甲基苯胺0.0619克加入内有少量无水乙醇的100ml容量瓶中，用无水乙醇定容，精确吸取该溶液1.00ml于10ml容量瓶中，用无水乙醇定容，即得标准贮备液(b)。
分别精确吸取标准贮备液（a）和标准贮备液(b)各1ml于100ml容量瓶中，定容，即得标准对照液。此标准对照液相当于样品中1，2-二氯苯的浓度50ppm左右，N.N-二甲基苯胺的浓度5ppm左右。
2.2.2 样品溶液的制备 精确称取氟胞嘧啶样品1.0克，于10ml容量瓶中，用无水乙醇溶解后定容。
2.3【2】 重复性
分别连续精确吸取（a）和(b)各1ml于10ml容量瓶中，用无水乙醇定容得标准对照溶液，吸取6ul分别进样。六次测定的1，2-二氯苯的峰面积RSD=0.87%；N，N-二甲基苯胺的峰面积RSD=1.66%。
2.4【2】分离度
由重复性中任一张色谱图计算出1，2二氯苯和N,N二甲基苯胺的分离度为9.41。
2.5【2】中间精密度
将2.3中的标准对照溶液放置2天后，由不同的检验人员吸取6ul分别进样。六次测定的1，2-二氯苯的峰面积RSD=0.28%；N，N-二甲基苯胺的峰面积RSD=1.53%。
2.6【2】线性
用标准贮备液（a）配制七种浓度的1，2-二氯苯测定其线性，得回归方程：y=13.347x-0.2557 ，相关系数(r):r=0.99997。用标准贮备液(b)配制七种浓度的N，N-二甲基苯胺测定其线性，得回归方程：y=20.221x-0.0335相关系数(r):r=0.99963。
2.7【2】准确度（回收率）
准确称氟胞嘧啶工作标准品1.0g于10ml容量瓶中（三份），然后分别加入2.2.1溶液(a)和溶液(b)0.7ml，1.0ml，1.3ml，配成三种浓度的样品。每个浓度连续进样三针，进样量为6ul。计算1，2-二氯苯各浓度的回收率分别是99.97%、100.52%、100.90%，RSD分别是0.04%、0.02%、0.24%；N，N二甲基苯胺的各浓度的回收率分别是99.13%、101.15%、99.44%，RSD分别是2.26%、0.54%、0.93%。
2.8【2】检测限 定量限
在选定的色谱条件下，以信噪为在3：1为最低检测限进行测定，结果表明浓度为0.0587ug/ml的1，2-二氯苯溶液，浓度为0.03095ug/ml的N，N-二甲基苯胺溶液，进样量为6 ul时产生的主峰信号约为噪音的3倍；以信噪为在10：1为定量限进行测定，结果表明浓度为0.2054ug/ml的1，2-二氯苯溶液，浓度为0.1548ug/ml的N，N-二甲基苯胺溶液，进样量为6 ul时产生的主峰信号约为噪音的10倍。
2.9【2】方法耐用性
分别测定2.3中的1，2-二氯苯和N,N-二甲基苯胺标准对照溶液放置0、1、2、4、6、8、24、48小时后其峰面积RSD=0.61% 和RSD=1.62%；分别使用南京化学试剂有限公司和上海化学试剂有限公司的无水乙醇配制对照液进行测定，使用DB-624(30m×0.53mm×3.0um) NO:us5342227H和DB-624(30m×0.53mm×3.0um) NO:us7120822H两个批号的色谱柱，测定结果均未有差异；分别设定柱温温度148℃、150℃、152℃，柱流速为3.8ml/min、4.0 ml/min、4.2 ml/min，平衡温度为85℃、90℃、95℃，平衡时间为8min、10 ml/min、12 ml/min，测定1，2-二氯苯和N,N-二甲基苯胺标准对照溶液，其结果都表明无较明显变化。
2.10【2】样品测试
分别称取FLC2009034、FLC2009035、FLC2009036三个批号的样品1.0g于10ml容量瓶中，用无水乙醇定容，将2.2.1的标准对照液和三批样品进行测试，结果显示该三批样品中的1，2-二氯苯和N,N-二甲基苯胺均未检出。
3 讨论
本方法溶剂出峰与两个标准峰能较好分离，空白溶剂不干扰测试；本方法灵敏度高、重现性好、分离效果好，具有很好的线性、准确性和耐用性，本方法能有效准确地控制氟胞嘧啶产品中1，2-二氯苯和N,N-二甲基苯胺两种溶剂残留，是一个实用可靠的检测方法。
参考文献
【1】2011年1月欧洲药品质量委员会出版的Ph.Eur.7.0药典第123-127页，2011年1月美国药典委员会出版的USP34药典第171-182页。
【2】 2005年人用药物注册技术要求国际协调会发布的ICHQ2指南和2010年中国医药科技出版社出版的中国药典2010版二部附录194-195页。
关键词 顶空进样法 氟胞嘧啶 残留溶剂
氟胞嘧啶化学名为4-氨基-5-氟-2(1H)-嘧啶酮，是一種抗真菌药，用于治疗白念球菌和隐球菌等感染。根据我公司氟胞嘧啶的工艺，产品氟胞嘧啶中的主要残留溶剂是1，2-二氯苯和N，N-二甲基苯胺，1，2-二氯苯的内控标准为50 ppm, N，N-二甲基苯胺的内控标准为5ppm,对残留溶剂1，2-二氯苯和N，N-二甲基苯胺的测试，现采用气相色谱顶空进样方法，有效地控制产品中的这两种残留溶剂，达到了满意的效果。
仪器与试药
安捷伦7890A气相色谱仪G1888顶空进样器 安捷伦Chemstation 色谱软件DB-624(30m×0.53mm×3.0um)石英毛细管柱及氢火焰离子化检测器 氟胞嘧啶工作标准品（FLC2010001S，本公司自制）1，2-二氯苯、N，N-二甲基苯胺和乙醇为色谱纯。
方法与结果
2.1【1】色谱条件
氮气作载气，柱流速4ml/min，进样器温度160℃，柱温150℃，检测器温度280℃，分流比：20：1，空气流速380ml/min，氢气流速30ml/min，尾吹+恒定柱流50ml/min。顶空进样瓶体积20ml，进样量6ul，样品定量环体积1ml，平衡温度90℃，定量环温度100℃，传输线温度110℃，平衡时间10min，加压时间0.08min，定量环填充时间0.05min，定量环平衡时间0.05min，进梯时间1.00min，检测周期25min。
2.2【1】样品和对照制备
2.2.1对照品溶液的制备（a）精确称取1，2-二氯苯0.0587克加入内有少量无水乙醇的100ml容量瓶中，用无水乙醇定容，即得标准贮备液（a）。
（b）精确称取N，N-二甲基苯胺0.0619克加入内有少量无水乙醇的100ml容量瓶中，用无水乙醇定容，精确吸取该溶液1.00ml于10ml容量瓶中，用无水乙醇定容，即得标准贮备液(b)。
分别精确吸取标准贮备液（a）和标准贮备液(b)各1ml于100ml容量瓶中，定容，即得标准对照液。此标准对照液相当于样品中1，2-二氯苯的浓度50ppm左右，N.N-二甲基苯胺的浓度5ppm左右。
2.2.2 样品溶液的制备 精确称取氟胞嘧啶样品1.0克，于10ml容量瓶中，用无水乙醇溶解后定容。
2.3【2】 重复性
分别连续精确吸取（a）和(b)各1ml于10ml容量瓶中，用无水乙醇定容得标准对照溶液，吸取6ul分别进样。六次测定的1，2-二氯苯的峰面积RSD=0.87%；N，N-二甲基苯胺的峰面积RSD=1.66%。
2.4【2】分离度
由重复性中任一张色谱图计算出1，2二氯苯和N,N二甲基苯胺的分离度为9.41。
2.5【2】中间精密度
将2.3中的标准对照溶液放置2天后，由不同的检验人员吸取6ul分别进样。六次测定的1，2-二氯苯的峰面积RSD=0.28%；N，N-二甲基苯胺的峰面积RSD=1.53%。
2.6【2】线性
用标准贮备液（a）配制七种浓度的1，2-二氯苯测定其线性，得回归方程：y=13.347x-0.2557 ，相关系数(r):r=0.99997。用标准贮备液(b)配制七种浓度的N，N-二甲基苯胺测定其线性，得回归方程：y=20.221x-0.0335相关系数(r):r=0.99963。
2.7【2】准确度（回收率）
准确称氟胞嘧啶工作标准品1.0g于10ml容量瓶中（三份），然后分别加入2.2.1溶液(a)和溶液(b)0.7ml，1.0ml，1.3ml，配成三种浓度的样品。每个浓度连续进样三针，进样量为6ul。计算1，2-二氯苯各浓度的回收率分别是99.97%、100.52%、100.90%，RSD分别是0.04%、0.02%、0.24%；N，N二甲基苯胺的各浓度的回收率分别是99.13%、101.15%、99.44%，RSD分别是2.26%、0.54%、0.93%。
2.8【2】检测限 定量限
在选定的色谱条件下，以信噪为在3：1为最低检测限进行测定，结果表明浓度为0.0587ug/ml的1，2-二氯苯溶液，浓度为0.03095ug/ml的N，N-二甲基苯胺溶液，进样量为6 ul时产生的主峰信号约为噪音的3倍；以信噪为在10：1为定量限进行测定，结果表明浓度为0.2054ug/ml的1，2-二氯苯溶液，浓度为0.1548ug/ml的N，N-二甲基苯胺溶液，进样量为6 ul时产生的主峰信号约为噪音的10倍。
2.9【2】方法耐用性
分别测定2.3中的1，2-二氯苯和N,N-二甲基苯胺标准对照溶液放置0、1、2、4、6、8、24、48小时后其峰面积RSD=0.61% 和RSD=1.62%；分别使用南京化学试剂有限公司和上海化学试剂有限公司的无水乙醇配制对照液进行测定，使用DB-624(30m×0.53mm×3.0um) NO:us5342227H和DB-624(30m×0.53mm×3.0um) NO:us7120822H两个批号的色谱柱，测定结果均未有差异；分别设定柱温温度148℃、150℃、152℃，柱流速为3.8ml/min、4.0 ml/min、4.2 ml/min，平衡温度为85℃、90℃、95℃，平衡时间为8min、10 ml/min、12 ml/min，测定1，2-二氯苯和N,N-二甲基苯胺标准对照溶液，其结果都表明无较明显变化。
2.10【2】样品测试
分别称取FLC2009034、FLC2009035、FLC2009036三个批号的样品1.0g于10ml容量瓶中，用无水乙醇定容，将2.2.1的标准对照液和三批样品进行测试，结果显示该三批样品中的1，2-二氯苯和N,N-二甲基苯胺均未检出。
3 讨论
本方法溶剂出峰与两个标准峰能较好分离，空白溶剂不干扰测试；本方法灵敏度高、重现性好、分离效果好，具有很好的线性、准确性和耐用性，本方法能有效准确地控制氟胞嘧啶产品中1，2-二氯苯和N,N-二甲基苯胺两种溶剂残留，是一个实用可靠的检测方法。
参考文献
【1】2011年1月欧洲药品质量委员会出版的Ph.Eur.7.0药典第123-127页，2011年1月美国药典委员会出版的USP34药典第171-182页。
【2】 2005年人用药物注册技术要求国际协调会发布的ICHQ2指南和2010年中国医药科技出版社出版的中国药典2010版二部附录194-195页。