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摘 要：本文采用正交试验法对板蓝根抗病毒成分的工艺进行研究，提高其提取率，以便于充分发挥药效。
关键词：板蓝根;靛玉红;提取工艺
板蓝根是十字花科菘蓝属植物菘蓝的干燥根，是中国传统中药。始载于《神农本草经》，味苦，性寒，具有清热解毒、凉血利咽的功效[1-2]。在临床上板蓝根常用于病毒性疾病及细菌感染性疾病。随着对板蓝根研究的深入，人们从板蓝根中提取分离的成分越来越多，尤其是脂溶性成分，在抗病毒方面具有十分重要的作用[3]。
1 材料
AR2140型电子天平（瑞士梅特勒-托利多仪器有限公司），1260系列高效液相色谱仪（美国安捷伦）。板蓝根均自山东省，经鉴定符合要求。靛玉红对照品（中国食品药品鉴定研究院），甲醇为色谱纯，冰醋酸为分析纯，水为屈臣氏水。
2方法与结果
2.1靛玉红分析方法的建立
2.1.1色谱条件
色谱柱：Agilent SB-C18柱（250mm×4.6mm）
检测波长：288nm
柱温：25℃
进样量：20μl
流速：1.0ml/min
流动相：甲醇-0.1%冰醋酸（80：20）
2.1.2 对照品溶液的制备
取靛玉红对照品约10mg，精密称定，置250ml量瓶中，加甲醇适量，超声处理20min使溶解，放至室温，用甲醇稀释至刻度，摇匀;从中取1ml，置500ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得（每1ml溶液中含靛玉红0.08μg）。
2.1.3 供试品溶液的制备
取供试品粉末约0.05g，精密称定，置5ml量瓶中，加甲醇适量，超声处理20min使溶解，放冷，加甲醇稀释至刻度，用微孔滤膜（0.22μm）滤过，滤液另器保存，即得。
2.1.4 线性关系考察
精密吸取对照品溶液0，1.0，2.0，2.5，3.75，5ml，分别置5ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，按色谱条件进样，测定峰面积。以对照品峰面积（Y）为纵坐标，对照品浓度（X）为横坐标，得回归方程Y=5499X+3.5879，r=0.9996，表明靛玉红浓度在0～0.08μg/ml范围内对峰面积呈良好线性关系。
2.1.5 精密度试验
取供试品溶液，于所建立的色谱条件下进样6次，记录对照品峰面积，并计算RSD =1.16%，小于2%，表明供试品含量测定方法的精密度良好。
2.1.6 稳定性试验
在本试验条件下，取供试品溶液分别在室温放置0，2，4，6，10，12h，于所建立的色谱条件下进样，记录峰面积并计算RSD=1.50%，表明供试品溶液至少在12h内稳定。
2.1.7 重复性试验
取同一批样品共6份，每份约0.5g，精密称定，按“2.1.3”项下方法制备成供试品溶液，于所建立的色谱条件下进样，记录峰面积，并计算RSD=0.80%，小于2%，表明含量测定方法重复性良好。
2.1.8 加样回收率试验
精密吸取已知含量的供试品溶液6份，分别精密加入0.08μg的靛玉红对照品，依法进行含量测定，按公式计算平均回收率为99.26%，RSD=0.47%，表明此方法可行。
2.2 提取工艺研究
2.2.1溶劑用量、提取次数、提取时间的优选
2.2.1.1药材吸醇量考察
加醇量是影响提取效率的重要因素之一，加醇量太少会导致提取不完全，过多则会导致溶剂的浪费，提高生产成本。药材吸醇率的考察意义在于更科学的确定加醇量。
按处方比例称取药材，共三份，各100g，加800ml 70%乙醇浸泡，以药材完全浸泡透芯为指标，每隔30min观察一次，直至药材全部浸透，滤出全部未被吸收的乙醇溶液，测量体积，计算吸醇量。结果见表1。
药材吸醇量结果表明：平均吸醇量为98ml，故确定加醇量为6倍、8倍、10倍。
2.2.1.2乙醇浓度的选择
根据文献资料，确定乙醇浓度为70%、75%、80%。
2.2.1.3 溶剂量选择
处方药材的平均吸醇量约药材质量的1倍，加溶剂量太大不但浪费溶剂，又使成本过高，故选择溶剂量为6倍、8倍、10倍。
2.2.1.4提取次数选择
按常规方法，选择提取次数依次为：1次、2次、3次。
2.2.1.5提取时间的选择
按常规方法，选择煎煮时间依次为1h、2h、3h。
2.2.2正交试验
按处方比例称取药材，共9份，各100g，以提取物中靛玉红含量为考察指标，优化乙醇回流提取工艺。
采用L9（34）的正交设计进行试验，按因素水平表（表2）设计的条件进行回流提取，提取液滤过，滤液合并，减压回收乙醇至无醇味，浓缩，干燥至恒重，依法测定干膏中靛玉红的含量，计算提取率。正交试验表见表3，方差分析表见表4。
结果表明，以靛玉红的含量为考核指标，影响乙醇提取工艺的因素作用顺序为：提取时间>提取次数>醇浓度>加醇量，其中提取时间的影响具有极显著性（P<0.05），A、B和D因素的影响没有显著性，考虑到要用最经济和最常规的方案，确定提取工艺应为A2B2C2D2，即加8倍于药材量的浓度为75%的乙醇提取二次，每次2h。
3讨论
3.1 前期研究中靛玉红的最大吸收波长在280nm和530nm，由于采用530nm波长作为检测波长时，液相图谱干扰较大，故采用280nm为检测波长。
3.2 提取工艺中乙醇浓度根据文献资料[4～5]，并结合实际生产最终确定正交试验乙醇浓度为70～80%。
参考文献
[1] 王建敏，李伟.板蓝根颗粒中有效成分的测定及药理作用研究进展[J].中国医药导报，2019，16（18）：49-52.
[2] 常宝勤，李梅梅，蔺华吉，等.板蓝根中生物碱靛蓝、靛玉红的提取与分析[J].检验监测，2019，22：40-43.
[3] 黄远，董福越，李楚源.板蓝根中主要化学成分含量测定方法研究进展[J].中国药业，2020，29（7）：150-156.
[4] 王璐璐，郑稳生.板蓝根中有效成分提取方法的研究[J].中成药，2005，27（12）：1387-1390.
[5] 史晓昱.板蓝根提取工艺及质量标准的研究[D].山西：山西医科大学，2007.
关键词：板蓝根;靛玉红;提取工艺
板蓝根是十字花科菘蓝属植物菘蓝的干燥根，是中国传统中药。始载于《神农本草经》，味苦，性寒，具有清热解毒、凉血利咽的功效[1-2]。在临床上板蓝根常用于病毒性疾病及细菌感染性疾病。随着对板蓝根研究的深入，人们从板蓝根中提取分离的成分越来越多，尤其是脂溶性成分，在抗病毒方面具有十分重要的作用[3]。
1 材料
AR2140型电子天平（瑞士梅特勒-托利多仪器有限公司），1260系列高效液相色谱仪（美国安捷伦）。板蓝根均自山东省，经鉴定符合要求。靛玉红对照品（中国食品药品鉴定研究院），甲醇为色谱纯，冰醋酸为分析纯，水为屈臣氏水。
2方法与结果
2.1靛玉红分析方法的建立
2.1.1色谱条件
色谱柱：Agilent SB-C18柱（250mm×4.6mm）
检测波长：288nm
柱温：25℃
进样量：20μl
流速：1.0ml/min
流动相：甲醇-0.1%冰醋酸（80：20）
2.1.2 对照品溶液的制备
取靛玉红对照品约10mg，精密称定，置250ml量瓶中，加甲醇适量，超声处理20min使溶解，放至室温，用甲醇稀释至刻度，摇匀;从中取1ml，置500ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得（每1ml溶液中含靛玉红0.08μg）。
2.1.3 供试品溶液的制备
取供试品粉末约0.05g，精密称定，置5ml量瓶中，加甲醇适量，超声处理20min使溶解，放冷，加甲醇稀释至刻度，用微孔滤膜（0.22μm）滤过，滤液另器保存，即得。
2.1.4 线性关系考察
精密吸取对照品溶液0，1.0，2.0，2.5，3.75，5ml，分别置5ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，按色谱条件进样，测定峰面积。以对照品峰面积（Y）为纵坐标，对照品浓度（X）为横坐标，得回归方程Y=5499X+3.5879，r=0.9996，表明靛玉红浓度在0～0.08μg/ml范围内对峰面积呈良好线性关系。
2.1.5 精密度试验
取供试品溶液，于所建立的色谱条件下进样6次，记录对照品峰面积，并计算RSD =1.16%，小于2%，表明供试品含量测定方法的精密度良好。
2.1.6 稳定性试验
在本试验条件下，取供试品溶液分别在室温放置0，2，4，6，10，12h，于所建立的色谱条件下进样，记录峰面积并计算RSD=1.50%，表明供试品溶液至少在12h内稳定。
2.1.7 重复性试验
取同一批样品共6份，每份约0.5g，精密称定，按“2.1.3”项下方法制备成供试品溶液，于所建立的色谱条件下进样，记录峰面积，并计算RSD=0.80%，小于2%，表明含量测定方法重复性良好。
2.1.8 加样回收率试验
精密吸取已知含量的供试品溶液6份，分别精密加入0.08μg的靛玉红对照品，依法进行含量测定，按公式计算平均回收率为99.26%，RSD=0.47%，表明此方法可行。
2.2 提取工艺研究
2.2.1溶劑用量、提取次数、提取时间的优选
2.2.1.1药材吸醇量考察
加醇量是影响提取效率的重要因素之一，加醇量太少会导致提取不完全，过多则会导致溶剂的浪费，提高生产成本。药材吸醇率的考察意义在于更科学的确定加醇量。
按处方比例称取药材，共三份，各100g，加800ml 70%乙醇浸泡，以药材完全浸泡透芯为指标，每隔30min观察一次，直至药材全部浸透，滤出全部未被吸收的乙醇溶液，测量体积，计算吸醇量。结果见表1。
药材吸醇量结果表明：平均吸醇量为98ml，故确定加醇量为6倍、8倍、10倍。
2.2.1.2乙醇浓度的选择
根据文献资料，确定乙醇浓度为70%、75%、80%。
2.2.1.3 溶剂量选择
处方药材的平均吸醇量约药材质量的1倍，加溶剂量太大不但浪费溶剂，又使成本过高，故选择溶剂量为6倍、8倍、10倍。
2.2.1.4提取次数选择
按常规方法，选择提取次数依次为：1次、2次、3次。
2.2.1.5提取时间的选择
按常规方法，选择煎煮时间依次为1h、2h、3h。
2.2.2正交试验
按处方比例称取药材，共9份，各100g，以提取物中靛玉红含量为考察指标，优化乙醇回流提取工艺。
采用L9（34）的正交设计进行试验，按因素水平表（表2）设计的条件进行回流提取，提取液滤过，滤液合并，减压回收乙醇至无醇味，浓缩，干燥至恒重，依法测定干膏中靛玉红的含量，计算提取率。正交试验表见表3，方差分析表见表4。
结果表明，以靛玉红的含量为考核指标，影响乙醇提取工艺的因素作用顺序为：提取时间>提取次数>醇浓度>加醇量，其中提取时间的影响具有极显著性（P<0.05），A、B和D因素的影响没有显著性，考虑到要用最经济和最常规的方案，确定提取工艺应为A2B2C2D2，即加8倍于药材量的浓度为75%的乙醇提取二次，每次2h。
3讨论
3.1 前期研究中靛玉红的最大吸收波长在280nm和530nm，由于采用530nm波长作为检测波长时，液相图谱干扰较大，故采用280nm为检测波长。
3.2 提取工艺中乙醇浓度根据文献资料[4～5]，并结合实际生产最终确定正交试验乙醇浓度为70～80%。
参考文献
[1] 王建敏，李伟.板蓝根颗粒中有效成分的测定及药理作用研究进展[J].中国医药导报，2019，16（18）：49-52.
[2] 常宝勤，李梅梅，蔺华吉，等.板蓝根中生物碱靛蓝、靛玉红的提取与分析[J].检验监测，2019，22：40-43.
[3] 黄远，董福越，李楚源.板蓝根中主要化学成分含量测定方法研究进展[J].中国药业，2020，29（7）：150-156.
[4] 王璐璐，郑稳生.板蓝根中有效成分提取方法的研究[J].中成药，2005，27（12）：1387-1390.
[5] 史晓昱.板蓝根提取工艺及质量标准的研究[D].山西：山西医科大学，2007.