【摘 要】
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以变铅青链霉菌为宿主研究了人TNFβ(hTNFβ)的异源表达.应用链霉菌S.venezuelae CBS762.70分泌产生的枯草杆菌蛋白酶抑制剂vsi基因的启动子、表达调控序列和分泌信号肽序列,
【机 构】
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中国医学科学院,中国协和医科大学,医药生物技术研究所,北京,100050Laboratory of Bacteriology,Rega Institute,Katholieke Universitei
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以变铅青链霉菌为宿主研究了人TNFβ(hTNFβ)的异源表达.应用链霉菌S.venezuelae CBS762.70分泌产生的枯草杆菌蛋白酶抑制剂vsi基因的启动子、表达调控序列和分泌信号肽序列,分别对hTNFβ进行了直接分泌表达、分泌融合表达和胞内表达.将hTNFβ的cDNA分别直接融合于vsi信号肽序列下游2个氨基酸处、vsi全长基因之后以及vsi起始密码子ATG的下游,获得的表达盒分别克隆至链霉菌高拷贝质粒pIJ486,转化Streptomyces lividans TK24,获得了重组菌株S.lividans(pIJ486-hTNFβ)、S.lividans(pIJ486-vsi-hTNFβ)和S.lividans(pIVPA-hTNFβ).分别对不同的重组菌株进行摇瓶培养,对其培养的上清液和细胞裂解液进行SDS-PAGE和Western杂交,结果表明:hTNFβ在重组菌株中均获得了表达,且直接分泌产物和胞内表达产物均具有生物学活性.hTNFβ直接分泌表达产物的分子量约为16 kDa,NB培养基中培养48 h时表达水平约为0.7 mg/L.胞内表达产物分子量与对照重组hTNFβ一致(18.7 kDa),但随培养时间的延长逐步降解为16 kDa,NB培养基中培养48 h时的表达水平(25.1 mg/L)远高于其直接分泌表达水平.
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