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摘 要：建立反相高效液相色谱法测定吡拉西坦注射液中吡拉西坦的含量。方法：采用奥泰公司 C18 色谱柱（220mm×4.6mm，5μm），甲醇-乙腈-水（3∶3：96）为流动相，检测波长为210nm，流速为1.0ml/min，柱温为30℃。吡拉西坦在0.1～0.55mg·mL-1范围内呈良好的线性关系（r=0.99995）。吡拉西坦平均回收率分别为99.5%。结论：本法简便、准确，可用于吡拉西坦注射液中吡拉西坦的含量测定。
关键词：吡拉西坦；含量；测定
吡拉西坦注射液适应症为适用于急、慢性脑血管病、脑外伤、各种中毒性脑病等多种原因所致的记忆减退及轻、中度脑功能障碍。吡拉西坦注射液也用于儿童智能发育迟缓。吡拉西坦注射液为脑代谢改善药，属于γ-氨基丁酸的环形衍生物，能促进脑内ATP，可促进乙酰胆碱合成并能增强神经兴奋的传导，具有促进脑内代谢作用[1-4]。吡拉西坦注射液对缺氧所致的逆行性健忘有改进作用，可以增强记忆，提高学习能力。目前主要生产吡拉西坦注射液的厂家有天津金耀集团湖北天药药业股份有限公司、广东星昊药业有限公司、广东星昊药业有限公司、上海第一生化药业有限公司、浙江瑞新药业股份有限公司等。本文采用高效液相法对吡拉西坦注射液中的吡拉西坦的进行了含量测定。
1 仪器与试药
1.1 仪器：Flexar液相色谱仪（珀金埃尔默仪器（上海）有现公司）； B03001-004在线脱气机（上海笛柏实验设备有限公司）；Alliance柱温箱；08890-xx超声波清洗器（北京中科科尔仪器有限公司）；JULABO TW系列通用水浴槽（优莱博技术（北京）有限公司）；FA124电子分析天平（上海舜宇恒平科学仪器有限公司）；XSYF-D 实验室废水处理设备（北京湘顺源科技有限公司）；ULABO 实验室温度控制器（优莱博技术（北京）有限公司）；JTU-1901 双光束紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）。
1.2 色谱柱：奥泰公司 C18 色谱柱（220mm×4.6mm，5μm）。
1.3 对照品：吡拉西坦。
1.4 试剂：甲醇（石家庄市京兆化工有限公司）、醋酸钠（利津县东海工贸有限公司）、庚烷磺酸钠（安庆市万盛精细化工有限责任公司）、磷酸二氢铵（上海科丰化学试剂有限公司）、冰醋酸（安庆市万盛精细化工有限责任公司）、三乙胺（上海科丰化学试剂有限公司）、乙腈（上海科丰化学试剂有限公司）。
1.5 试药：吡拉西坦注射液
2 测定方法确定
2.1 色谱条件
依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下[5-10]。流动相：甲醇-乙腈-水（3∶3：96）为流动相，检测波长：210nm，流速：1.0m·min-1。柱温：30℃。理论板数按吡拉西坦峰计算应不得低于2000。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取吡拉西坦对照品适量，置容量瓶中，加流动相制成每1mL含0.3mg的溶液，即得。
2.3 供试品溶液的制备
精密量取供试品，置具塞锥形瓶中，精密加入流动相20mL，密塞，精密称定重量，超声处理10分钟，放冷，精密称定，用流动相补足重量，摇匀，滤过。取续滤液，即得。
2.4 专属性试验
依照处方取除吡拉西坦，按样品制备工艺制成阴性对照样品，照2.3项下供试品溶液的制备方法制成阴性液，依上述方法测定，结果在吡拉西坦出峰处阴性液无色谱峰，结果阴性试验没有干扰，表明本方法专属性良好。
2.5 精密度试验
精密称取吡拉西坦对照品适量，加流动相使溶解，制成浓度为0.3mg·mL-1的供试品溶液。照上述色谱条件，精密吸取10μl，连续进样6次，记录峰面积。结果，RSD=0.83%，表明本方法精密度良好。
2.6 对照品的线性考察
精密称取适量吡拉西坦对照品，加入流动相溶液使溶解分别配制成每毫升含0.1、0.15、0.25、0.35、0.4.、0.45、0.55毫克的溶液。分别精密上述溶液吸取10μL，注人液相色谱仪，依照2.1项下的色谱条件测定，记录色谱峰。以峰面积（Y）为纵坐标，对照品进样量（X）为横坐标，绘制标准曲线。结果表明，吡拉西坦在0.1～0.55mg·mL-1范围内呈良好的线性关系。
2.7 重现性试验
称取同一批的吡拉西坦样品6份，按测定方法项下的方法制备供试品溶液，测定含量，并计算样品的RSD值，结果RSD为0.69%，结果表明此方法的重现性良好。
2.8 准确度试验
取对照品适量，精密称取已知含量的样品9份，置量瓶中，分别精密加入吡拉西坦对照品，按项下方法制备成80%、100%、120%。取模拟样品照“含量测定”项下方法试验，计算回收率为99.5%，RSD为0.73%。
2.9 样品含量测定
依照上述含量测定方法，再按外标法以峰面积计算样品的含量，结果三批样品的含量分别为标示量的100.2%、100.1%、100.2%。
3 讨论
早年的药理研究表明：吡拉西坦具有抗大脑皮质缺氧，增加脑血流量、促进能量转换和脑蛋白合成以及促进脑半球间经由胼胝体的信息传递过程等作用，从而改善机体的学习记忆功能。分别考察0.04moloL-1磷酸二氢铵溶液-乙腈-三乙胺（60∶40：0.01），甲醇-水-冰醋酸（13∶86∶1），甲醇-水-冰醋酸（33∶66∶1），甲醇-0.01mol/L醋酸鈉溶液-0.04mol/L庚烷磺酸钠-冰醋酸-三乙胺（20∶40：40：0.01：0.01），甲醇-1%冰醋酸溶液（28∶72），甲醇-乙腈-水（3∶3：96）不同比例的流动相，结果以甲醇-乙腈-水（3∶3：96）为流动相为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用甲醇-乙腈-水（3∶3：96）为流动相为流动相。本实验采用高效液相法效果好、方法简便、快捷、准确、专属性好，可用于吡拉西坦注射液中吡拉西坦的含量测定。
参考文献
[1]陈松柏.吡拉西坦口服液治疗脑外伤后智力障碍120例疗效观察[J].医药导报，1995年01期.
[2]周红宇，郑国统，张士善.吡拉西坦促记忆作用原理的研究进展[J].中国药理学通报，1996年02期.
[3]费智敏，罗其中，王勇，金萍茜.赖氨酸、吡拉西坦、吡硫醇治疗脑损伤后综合征的对比[J].中国新药与临床杂志，1995年03期.
[4]杜尊铭，李淑兰，徐嗣荪.对比复方吡拉西坦与安慰剂治疗阿耳茨海默病[J].中国新药与临床杂志，1996年04期.
[5]任淑玲，欧阳晓玫.高效液相色谱法测定吡拉西坦制剂的含量[J].药物分析杂志，2001年03期.
[6]王伶，孙欣.HPLC法测定吡拉西坦氯化钠注射液的含量[A]，2006第六届中国药学会学术年会论文集[C]，2006年.
[7]刘放，孙洁胤，周芝芳.反相高效液相色谱法测定注射用吡拉西坦的含量和有关物质[A]，2006第六届中国药学会学术年会论文集[C]，2006年.
[8]赵春香，姜茁松，李春实，汝秋明，章贵杰，郑莲秀.RP-HPLC测定复方活脑素胶囊中吡拉西坦的含量[J].中成药，2001年08期.
[9]修虹.HPLC-ELSD法同时测定复方吡拉西坦脑蛋白水解物胶囊中吡拉西坦和谷氨酸的含量[A]，2009年中国药学大会暨第九届中国药师周论文集[C]，2009年.
[10]孔令星，王正容，李玉珍.高效液相色谱法测定脑复康注射液的含量[J].中国药事，2002年01期.
关键词：吡拉西坦；含量；测定
吡拉西坦注射液适应症为适用于急、慢性脑血管病、脑外伤、各种中毒性脑病等多种原因所致的记忆减退及轻、中度脑功能障碍。吡拉西坦注射液也用于儿童智能发育迟缓。吡拉西坦注射液为脑代谢改善药，属于γ-氨基丁酸的环形衍生物，能促进脑内ATP，可促进乙酰胆碱合成并能增强神经兴奋的传导，具有促进脑内代谢作用[1-4]。吡拉西坦注射液对缺氧所致的逆行性健忘有改进作用，可以增强记忆，提高学习能力。目前主要生产吡拉西坦注射液的厂家有天津金耀集团湖北天药药业股份有限公司、广东星昊药业有限公司、广东星昊药业有限公司、上海第一生化药业有限公司、浙江瑞新药业股份有限公司等。本文采用高效液相法对吡拉西坦注射液中的吡拉西坦的进行了含量测定。
1 仪器与试药
1.1 仪器：Flexar液相色谱仪（珀金埃尔默仪器（上海）有现公司）； B03001-004在线脱气机（上海笛柏实验设备有限公司）；Alliance柱温箱；08890-xx超声波清洗器（北京中科科尔仪器有限公司）；JULABO TW系列通用水浴槽（优莱博技术（北京）有限公司）；FA124电子分析天平（上海舜宇恒平科学仪器有限公司）；XSYF-D 实验室废水处理设备（北京湘顺源科技有限公司）；ULABO 实验室温度控制器（优莱博技术（北京）有限公司）；JTU-1901 双光束紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）。
1.2 色谱柱：奥泰公司 C18 色谱柱（220mm×4.6mm，5μm）。
1.3 对照品：吡拉西坦。
1.4 试剂：甲醇（石家庄市京兆化工有限公司）、醋酸钠（利津县东海工贸有限公司）、庚烷磺酸钠（安庆市万盛精细化工有限责任公司）、磷酸二氢铵（上海科丰化学试剂有限公司）、冰醋酸（安庆市万盛精细化工有限责任公司）、三乙胺（上海科丰化学试剂有限公司）、乙腈（上海科丰化学试剂有限公司）。
1.5 试药：吡拉西坦注射液
2 测定方法确定
2.1 色谱条件
依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下[5-10]。流动相：甲醇-乙腈-水（3∶3：96）为流动相，检测波长：210nm，流速：1.0m·min-1。柱温：30℃。理论板数按吡拉西坦峰计算应不得低于2000。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取吡拉西坦对照品适量，置容量瓶中，加流动相制成每1mL含0.3mg的溶液，即得。
2.3 供试品溶液的制备
精密量取供试品，置具塞锥形瓶中，精密加入流动相20mL，密塞，精密称定重量，超声处理10分钟，放冷，精密称定，用流动相补足重量，摇匀，滤过。取续滤液，即得。
2.4 专属性试验
依照处方取除吡拉西坦，按样品制备工艺制成阴性对照样品，照2.3项下供试品溶液的制备方法制成阴性液，依上述方法测定，结果在吡拉西坦出峰处阴性液无色谱峰，结果阴性试验没有干扰，表明本方法专属性良好。
2.5 精密度试验
精密称取吡拉西坦对照品适量，加流动相使溶解，制成浓度为0.3mg·mL-1的供试品溶液。照上述色谱条件，精密吸取10μl，连续进样6次，记录峰面积。结果，RSD=0.83%，表明本方法精密度良好。
2.6 对照品的线性考察
精密称取适量吡拉西坦对照品，加入流动相溶液使溶解分别配制成每毫升含0.1、0.15、0.25、0.35、0.4.、0.45、0.55毫克的溶液。分别精密上述溶液吸取10μL，注人液相色谱仪，依照2.1项下的色谱条件测定，记录色谱峰。以峰面积（Y）为纵坐标，对照品进样量（X）为横坐标，绘制标准曲线。结果表明，吡拉西坦在0.1～0.55mg·mL-1范围内呈良好的线性关系。
2.7 重现性试验
称取同一批的吡拉西坦样品6份，按测定方法项下的方法制备供试品溶液，测定含量，并计算样品的RSD值，结果RSD为0.69%，结果表明此方法的重现性良好。
2.8 准确度试验
取对照品适量，精密称取已知含量的样品9份，置量瓶中，分别精密加入吡拉西坦对照品，按项下方法制备成80%、100%、120%。取模拟样品照“含量测定”项下方法试验，计算回收率为99.5%，RSD为0.73%。
2.9 样品含量测定
依照上述含量测定方法，再按外标法以峰面积计算样品的含量，结果三批样品的含量分别为标示量的100.2%、100.1%、100.2%。
3 讨论
早年的药理研究表明：吡拉西坦具有抗大脑皮质缺氧，增加脑血流量、促进能量转换和脑蛋白合成以及促进脑半球间经由胼胝体的信息传递过程等作用，从而改善机体的学习记忆功能。分别考察0.04moloL-1磷酸二氢铵溶液-乙腈-三乙胺（60∶40：0.01），甲醇-水-冰醋酸（13∶86∶1），甲醇-水-冰醋酸（33∶66∶1），甲醇-0.01mol/L醋酸鈉溶液-0.04mol/L庚烷磺酸钠-冰醋酸-三乙胺（20∶40：40：0.01：0.01），甲醇-1%冰醋酸溶液（28∶72），甲醇-乙腈-水（3∶3：96）不同比例的流动相，结果以甲醇-乙腈-水（3∶3：96）为流动相为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用甲醇-乙腈-水（3∶3：96）为流动相为流动相。本实验采用高效液相法效果好、方法简便、快捷、准确、专属性好，可用于吡拉西坦注射液中吡拉西坦的含量测定。
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[6]王伶，孙欣.HPLC法测定吡拉西坦氯化钠注射液的含量[A]，2006第六届中国药学会学术年会论文集[C]，2006年.
[7]刘放，孙洁胤，周芝芳.反相高效液相色谱法测定注射用吡拉西坦的含量和有关物质[A]，2006第六届中国药学会学术年会论文集[C]，2006年.
[8]赵春香，姜茁松，李春实，汝秋明，章贵杰，郑莲秀.RP-HPLC测定复方活脑素胶囊中吡拉西坦的含量[J].中成药，2001年08期.
[9]修虹.HPLC-ELSD法同时测定复方吡拉西坦脑蛋白水解物胶囊中吡拉西坦和谷氨酸的含量[A]，2009年中国药学大会暨第九届中国药师周论文集[C]，2009年.
[10]孔令星，王正容，李玉珍.高效液相色谱法测定脑复康注射液的含量[J].中国药事，2002年01期.