【摘 要】
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目的:克隆人血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor165,VEGF165)和血管生成素-1(angiopoiettin-1)的全长编码基因,构建表达该基因的复制缺陷型腺病毒载体Ad-A
【机 构】
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南京医科大学第一附属医院心脏内科,江苏省南京市,210029南京大学分子医学研究所,江苏省南京市,210029;美国东田纳西州大学James H.Quillen医学院外科系;
【基金项目】
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hVEGF165\/Angiopoietin-1基因转移促血管生成作用研究项目;
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目的:克隆人血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor165,VEGF165)和血管生成素-1(angiopoiettin-1)的全长编码基因,构建表达该基因的复制缺陷型腺病毒载体Ad-Ang1和Ad-VEGF165.方法:通过RT-PCR方法克隆人VEGF165和Ang1全长编码基因.Ad-VEGF165和Ad-Ang1通过同源重组方法构建.将Ad-VEGF165和/或Ad-Ang1转染大鼠胚胎心脏成肌细胞(H9C2)24 h后,Western blot方法分析VEGF165和Ang1蛋白表达量;核酸电泳分析细胞基因组降解检测凋亡水平.结果:测序显示VEGF165序列与基因库序列相同;Ang1序列与基因库序列存在一个碱基的差异,但编码氨基酸无改变.VEGF165和Ang1蛋白表达分别为对照组的11.65倍和3.53倍.Ad-VEGF165和/或Ad-Ang1转染后的H9C2细胞对过氧化氢诱导的细胞凋亡具有明显的抵抗能力.结论:所构建的Ad-Ang1和Ad-VEGF165能有效转染心脏成肌细胞,表达出功能性目的蛋白,具有抗细胞凋亡作用.
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