【摘 要】
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目的观察S3核糖体蛋白(S3rp)基因表达的改变对白血病耐药性的影响.方法通过RT-PCR方法获得含S3rp基因完整开放阅读框架(ORF)的cDNA,并将其克隆到pGEM-T Easy载体里,然后通过亚克隆方法将pGEM-T Easy重组质粒里的S3rp cDNA片段克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+)中,分别构建正向插入和反向插入的S3rp cDNA重组质粒,进行基因转染.将正义S3rp c
【机 构】
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310006,杭州,浙江省中医院血液科,浙江大学肿瘤研究所
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目的观察S3核糖体蛋白(S3rp)基因表达的改变对白血病耐药性的影响.方法通过RT-PCR方法获得含S3rp基因完整开放阅读框架(ORF)的cDNA,并将其克隆到pGEM-T Easy载体里,然后通过亚克隆方法将pGEM-T Easy重组质粒里的S3rp cDNA片段克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+)中,分别构建正向插入和反向插入的S3rp cDNA重组质粒,进行基因转染.将正义S3rp cDNA真核表达质粒转染K562细胞,使其S3rp基因表达增加,观察其对化疗药物敏感性的改变;将反义S3rp cDNA真核表达质粒转染具有多药耐药(MDR)表型的K562/DOX细胞,阻碍其S3rp基因的表达,观察其对化疗药物耐药性的改变.结果转染正义S3rp cDNA真核表达质粒后,K562细胞对阿霉素的耐药性比未转染的K562细胞增强5.8倍;转染反义S3rp cDNA真核表达质粒后,K562/DOX细胞对阿霉素的耐药性比未转染的K562/DOX细胞降低69%.结论 S3rp基因过表达在K562/DOX细胞耐药性的形成中起重要作用.
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