【摘 要】
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以孵化18d的广西土鸡鸡胚为实验材料,采用两步酶消化法分离鸡胚睾丸支持细胞,置于37℃、5%CO2的培养箱中培养,用低渗的磷酸缓冲液(PBS)处理进行纯化,并对原代和传代支持细胞
【机 构】
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扬州大学动物科学与技术学院,湖州师范学院生命科学学院
【基金项目】
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国家自然科学基金(30500270);浙江省科技攻关重点计划项目(2005C22052);浙江省自然科学基金(Y304194);湖州市自然科学基金(2006YZ08);湖州师范学院校级课题(KX23027)
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以孵化18d的广西土鸡鸡胚为实验材料,采用两步酶消化法分离鸡胚睾丸支持细胞,置于37℃、5%CO2的培养箱中培养,用低渗的磷酸缓冲液(PBS)处理进行纯化,并对原代和传代支持细胞进行了鉴定。结果显示,睾丸支持细胞生长良好,已传至第4代;经低渗处理,可去除绝大部分的生精细胞,获得的支持细胞纯度可达95%;鉴定结果显示,支持细胞为碱性磷酸酶(AKP)阴性;油红O染色显示,支持细胞胞质内含有大量的脂肪滴,核内有双极小体;丫啶橙染色证明支持细胞的细胞质中富含RNA,细胞核内的DNA含量也较高;罗丹明123染色证明支持细胞含有丰富的线粒体。结论:经两步酶消化法以及低渗处理后能得到纯度较高的鸡胚睾丸支持细胞;37℃、5%CO2的培养条件适宜支持细胞的生长;AKP染色、油红O、丫啶橙和罗丹明123等方法简单易行,适用于鸡胚睾丸支持细胞的鉴定。
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