【摘 要】
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目的探讨抑制哺乳动物不育系20样激酶1(MST1)通路对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病肾病大鼠的保护作用及其机制。方法54只雄性健康SD大鼠随机被分为健康对照组(A组,n=18);MST1抑制组(B组,n=18);糖尿病模型组(C组,n=18)。采用单侧腹腔注射链脲佐菌素(50 mg/kg)方法制备糖尿病大鼠模型。除接受链脲佐菌素外,B组大鼠接受含MST1干扰RNA序列(shRNA)的慢病毒载体
【机 构】
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目的探讨抑制哺乳动物不育系20样激酶1(MST1)通路对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病肾病大鼠的保护作用及其机制。
方法54只雄性健康SD大鼠随机被分为健康对照组(A组,n=18);MST1抑制组(B组,n=18);糖尿病模型组(C组,n=18)。采用单侧腹腔注射链脲佐菌素(50 mg/kg)方法制备糖尿病大鼠模型。除接受链脲佐菌素外,B组大鼠接受含MST1干扰RNA序列(shRNA)的慢病毒载体注射;C组大鼠接受空载慢病毒载体注射。造模后4、8、12周为观察时间点,自动生化仪上检测各时间点大鼠24 h尿蛋白量、血糖及血肌酐;HE染色观察肾组织病理改变;透射电镜下观察足细胞及基底膜改变;免疫组织化学方法观察MST1表达强度及定位;Western印迹法检测肾组织MST1、磷酸化MST1、足细胞相关蛋白nephrin、凋亡相关蛋白半胱天冬蛋白酶(Caspase- 3)、肾细胞凋亡相关基因(FasL)等蛋白的表达变化。
结果(1) 3组大鼠各观察时间点血肌酐比较差异无统计学意义(均P>0.05);与A组比较,B、C组大鼠造模后72 h血糖明显升高(均P<0.05);B、C组间比较,各时间点血糖差异无统计学意义(均P>0.05);与C组比较,B组大鼠24 h尿蛋白量在造模后4周明显减少(P<0.05)。(2) A组大鼠肾组织未见明显病变;B、C组大鼠肾组织可见系膜增生性改变,未见明显K-W结节样改变;电镜下可见足细胞融合、基底膜增厚改变。系膜增生系数(MEI)比较结果示B组病变轻于C组(P<0.05)。(3) Western印迹结果显示,与A组比较,B、C组大鼠各时间点肾组织MST1、磷酸化MST1、Caspase-3、FasL表达明显增高,nephrin表达明显降低(均P<0.05);与同时间点C组比较,B组大鼠肾组织MST1、磷酸化-MST1、Caspase-3、FasL表达降低,nephrin表达增高(均P<0.05)。(4)免疫组化结果显示,A组大鼠肾小球及间质可见有MST1表达,以肾小管上皮细胞胞质多见;B、C组大鼠肾组织MST1表达均增多,变化趋势与Western印迹结果相似。
结论MST1通路可能参与了糖尿病肾病的组织损伤,抑制MST1表达可减轻链脲佐菌素诱导的糖尿病模型的肾组织细胞损伤。
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