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当今社会,肝脏疾病严重影响着人类的健康。尤其是由药物毒性引起的肝损伤--急性肝损伤,约占报告病例数的90%以上。急性肝损伤疾病,成为常规的一种肝脏疾病,正严重危害着人类的健康[1]。急性肝损伤可延展为慢性,表现为长期的肝功能异常、肝硬化,最终可引起肝死亡,同时伴有其他脏器的明显损害或肝外超敏反应症状。部分患者可发生暴发性或重症肝功能衰竭并成为肝纤维化,肝硬化、肝癌等疾病发生的重要因素[2]。研发抗肝脏疾病损伤的有效药物,尤其从大自然中获得服用安全、药效稳定的天然保肝药成为国内外政府及相关部门关注的热点显得尤为重要[4]。
贯叶连翘(St.john'swort),又名贯叶金丝桃,俗称为圣约翰草,系藤黄科金丝桃属多年生草本植物,其性平,味辛苦涩,具有清心明目、舒经活血、止血生肌、解毒消炎、利湿之功效,抗菌消炎、收敛止血、调经活血、消肿止痛之功效,在民间已有二千四百余年的药用历史。贯叶连翘富含多种有效成分如生物碱、黄酮类、多糖、氨基酸等[3],具有抗菌、抗病毒、抗炎和免疫、保护心血管系统、抗肿瘤、保肝及神经保护等广泛的药理作用,具有较好的临床应用价值[5]。研究表明,贯叶连翘提取物对小鼠急性肝损伤有较好的预防和保护作用,本研究采用动物肝损伤模型,建立贯叶连翘不同部位对肝损伤保护的研究。为进一步追踪其活性成分提供实验参考。
1材料与方法
1.1 药品 谷丙转氨酶、谷草谷丙转氨酶等试剂盒(南京建成生物工程研究所);联苯双酯(广西星群药业股份有限公司)、四氯化碳、95%乙醇等均为分析纯。
1.2.实验动物
实验动物为昆明种小鼠,由第四军医大学实验动物中心提供。
2实验内容与结果
2.1 方法
2.1.1 药液的处理 将粉碎的原药材用95%乙醇和水回流提取, 浓缩蒸干得醇提物和水提物。醇提物用适量水悬浮后依次用石油醚、水饱和的乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃取,各部分萃取液浓缩得到不同极性部位浸膏。将浸膏处理成混悬液。
2.1.2 肝损伤模型的建立 将小鼠雌雄各半110只,常规饲养3天,随机进行分组,每组10只,分别为模型组(A)、正常组(B)1、联苯双酯对照组(C),石油醚高剂量组( D) 、石油醚低剂量组( E) 、醋酸乙酯高剂量组( F) 、醋酸乙酯低剂量组( G ) 、正丁醇高剂量组 ( H) 、正丁醇低剂量组( I) 、水高剂量组( J) 、水低剂量组( K)。正常组和模型组以灌胃给予小鼠0.3 ml生理盐水,其余各组分别按高低剂量(100mg·kg-1、300mg·kg-1)分别给予不同剂量灌胃和联苯双酯,每天1次,连续14 d。末次给药后8h,实验时,正常组小灌胃生理盐水溶液0.3 ml,其他各组均灌胃0.2%的四氯化碳溶液(橄榄油溶解)造模,一次性建立肝损伤模型。随后所有小鼠禁食8 h,收集血液,分离血清检测ALT、AST等指标。
2.1.3 统计学分析 应用SPSS 17.0 统计软件进行分析,定量资料以x ± s 表示;符合正态分布且方差齐性的资料采用两独立样本的t 检验,不符合正态分布的资料采用秩和检验。
2.2 实验结果
(与正常对照组比较*p < 0.05;与模型组比较**p < 0.01,***p < 0.05)
表1为贯叶连翘不同部位提取物对CCl4诱使的肝损伤小鼠血清ALT和AST活力的影响。由表可知,模型组中大鼠血清中 ALT 和 AST 的活性显著升高,说明本实验模型很成功。CCl4造模后模型组A的血清中ALT和AST与正常对照组B相比均有显著性差异。与模型组相比较, 动物口服阳性对照药 ( C) 能非常明显的抑制两种转氨酶的升高。动物口服贯叶连翘醋酸乙酯( F) 和正丁醇部位的高低剂量组( H、I) 均可明显抑制大鼠血清中 ALT 、AST 的升高,而且正丁醇部位的高低剂量组( H、I)的抑制效果更为明显 。因此初步判断正丁醇部位为抑制CCl4诱使的肝损伤引起的转氨酶升高的药效活性部位。结果表明,贯叶连翘正丁醇部位能够明顯降低肝损伤小鼠血清ALT和AST水平,其作用与联苯双酯相接近。
同时,在光镜观察下可见模型组肝小叶结构破坏, 肝细胞索状排列不明显, 可见明显淤血。肝细胞明显肿胀, 点灶状坏死多见。阳性对照药和红丝线草正丁醇部位的高低剂量组所见病变较损伤组明显减轻, 肝小叶结构基本正常, 细胞索状排列较整齐,肝内淤血及细胞肿胀明显减轻, 可见少量点灶状坏死。病理检查结果亦表明动物口服贯叶连翘正丁醇部位对肝损伤有一定的修复作用。
3 讨论
本研究采用动物肝损伤模型,建立贯叶连翘不同部位对肝损伤保护作用的研究,结果表明,贯叶连翘正丁醇部位能够明显降低肝损伤小鼠血清ALT和AST水平,其作用与联苯双酯相接近。因此表明贯叶连翘提取物对小鼠急性肝损伤有较好的预防和保护作用。为进一步追踪其活性成分提供实验参考。
参考文献:
[1]朱云,成佳黛,王立福,杨慧银,王仲霞,周坤,肖小河,李永纲.中医药治疗药物性肝损伤的研究概况[J]. 中西医结合肝病杂志,2014,04:254-256.
[2]侯宝霞.药物性肝损伤的临床分析[J].中国医药指南,2014,16:125-126.
[3]符继红,张丽静,胡西塔尔.高效液相色谱法测定贯叶连翘中氨基酸的含量[J]. 分析仪器,2007,01:27-30.
[4]余理红,郑清明,秦路平.贯叶连翘不同提取部位抗抑郁作用的药理筛选[J].海军医学杂志,2004, 03:195-197.
[5]马昆,刘燕玲. 中药引起的药物性肝损伤研究进展[J].光明中医,2015, 04: 907-91.
贯叶连翘(St.john'swort),又名贯叶金丝桃,俗称为圣约翰草,系藤黄科金丝桃属多年生草本植物,其性平,味辛苦涩,具有清心明目、舒经活血、止血生肌、解毒消炎、利湿之功效,抗菌消炎、收敛止血、调经活血、消肿止痛之功效,在民间已有二千四百余年的药用历史。贯叶连翘富含多种有效成分如生物碱、黄酮类、多糖、氨基酸等[3],具有抗菌、抗病毒、抗炎和免疫、保护心血管系统、抗肿瘤、保肝及神经保护等广泛的药理作用,具有较好的临床应用价值[5]。研究表明,贯叶连翘提取物对小鼠急性肝损伤有较好的预防和保护作用,本研究采用动物肝损伤模型,建立贯叶连翘不同部位对肝损伤保护的研究。为进一步追踪其活性成分提供实验参考。
1材料与方法
1.1 药品 谷丙转氨酶、谷草谷丙转氨酶等试剂盒(南京建成生物工程研究所);联苯双酯(广西星群药业股份有限公司)、四氯化碳、95%乙醇等均为分析纯。
1.2.实验动物
实验动物为昆明种小鼠,由第四军医大学实验动物中心提供。
2实验内容与结果
2.1 方法
2.1.1 药液的处理 将粉碎的原药材用95%乙醇和水回流提取, 浓缩蒸干得醇提物和水提物。醇提物用适量水悬浮后依次用石油醚、水饱和的乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃取,各部分萃取液浓缩得到不同极性部位浸膏。将浸膏处理成混悬液。
2.1.2 肝损伤模型的建立 将小鼠雌雄各半110只,常规饲养3天,随机进行分组,每组10只,分别为模型组(A)、正常组(B)1、联苯双酯对照组(C),石油醚高剂量组( D) 、石油醚低剂量组( E) 、醋酸乙酯高剂量组( F) 、醋酸乙酯低剂量组( G ) 、正丁醇高剂量组 ( H) 、正丁醇低剂量组( I) 、水高剂量组( J) 、水低剂量组( K)。正常组和模型组以灌胃给予小鼠0.3 ml生理盐水,其余各组分别按高低剂量(100mg·kg-1、300mg·kg-1)分别给予不同剂量灌胃和联苯双酯,每天1次,连续14 d。末次给药后8h,实验时,正常组小灌胃生理盐水溶液0.3 ml,其他各组均灌胃0.2%的四氯化碳溶液(橄榄油溶解)造模,一次性建立肝损伤模型。随后所有小鼠禁食8 h,收集血液,分离血清检测ALT、AST等指标。
2.1.3 统计学分析 应用SPSS 17.0 统计软件进行分析,定量资料以x ± s 表示;符合正态分布且方差齐性的资料采用两独立样本的t 检验,不符合正态分布的资料采用秩和检验。
2.2 实验结果
(与正常对照组比较*p < 0.05;与模型组比较**p < 0.01,***p < 0.05)
表1为贯叶连翘不同部位提取物对CCl4诱使的肝损伤小鼠血清ALT和AST活力的影响。由表可知,模型组中大鼠血清中 ALT 和 AST 的活性显著升高,说明本实验模型很成功。CCl4造模后模型组A的血清中ALT和AST与正常对照组B相比均有显著性差异。与模型组相比较, 动物口服阳性对照药 ( C) 能非常明显的抑制两种转氨酶的升高。动物口服贯叶连翘醋酸乙酯( F) 和正丁醇部位的高低剂量组( H、I) 均可明显抑制大鼠血清中 ALT 、AST 的升高,而且正丁醇部位的高低剂量组( H、I)的抑制效果更为明显 。因此初步判断正丁醇部位为抑制CCl4诱使的肝损伤引起的转氨酶升高的药效活性部位。结果表明,贯叶连翘正丁醇部位能够明顯降低肝损伤小鼠血清ALT和AST水平,其作用与联苯双酯相接近。
同时,在光镜观察下可见模型组肝小叶结构破坏, 肝细胞索状排列不明显, 可见明显淤血。肝细胞明显肿胀, 点灶状坏死多见。阳性对照药和红丝线草正丁醇部位的高低剂量组所见病变较损伤组明显减轻, 肝小叶结构基本正常, 细胞索状排列较整齐,肝内淤血及细胞肿胀明显减轻, 可见少量点灶状坏死。病理检查结果亦表明动物口服贯叶连翘正丁醇部位对肝损伤有一定的修复作用。
3 讨论
本研究采用动物肝损伤模型,建立贯叶连翘不同部位对肝损伤保护作用的研究,结果表明,贯叶连翘正丁醇部位能够明显降低肝损伤小鼠血清ALT和AST水平,其作用与联苯双酯相接近。因此表明贯叶连翘提取物对小鼠急性肝损伤有较好的预防和保护作用。为进一步追踪其活性成分提供实验参考。
参考文献:
[1]朱云,成佳黛,王立福,杨慧银,王仲霞,周坤,肖小河,李永纲.中医药治疗药物性肝损伤的研究概况[J]. 中西医结合肝病杂志,2014,04:254-256.
[2]侯宝霞.药物性肝损伤的临床分析[J].中国医药指南,2014,16:125-126.
[3]符继红,张丽静,胡西塔尔.高效液相色谱法测定贯叶连翘中氨基酸的含量[J]. 分析仪器,2007,01:27-30.
[4]余理红,郑清明,秦路平.贯叶连翘不同提取部位抗抑郁作用的药理筛选[J].海军医学杂志,2004, 03:195-197.
[5]马昆,刘燕玲. 中药引起的药物性肝损伤研究进展[J].光明中医,2015, 04: 907-91.