【摘 要】
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目的 重组表达棘阿米巴热休克蛋白20(Heat shock protein 20,HSP20),并对HSP20作为疫苗候选分子的免疫活性进行验证.方法 以棘阿米巴滋养体cDNA为模板,PCR扩增HSP20基因,构建
【机 构】
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吉林医药学院,吉林吉林132013;延边大学医学院;吉林市中心医院
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目的 重组表达棘阿米巴热休克蛋白20(Heat shock protein 20,HSP20),并对HSP20作为疫苗候选分子的免疫活性进行验证.方法 以棘阿米巴滋养体cDNA为模板,PCR扩增HSP20基因,构建pET-22b-HSP20原核表达载体,并将其转化大肠杆菌感受态细胞BL21;采用1 mmol/L IPTG诱导重组HSP20蛋白(Recombinant heat shock protein 20,r-HSP20)表达,并进行可溶性分析.采用His亲和层析法纯化r-HSP20,并免疫家兔制备兔多克隆抗体;采用ELISA试剂盒检测多克隆抗体IgG1及IgG2a分型;Western blot鉴定r-HSP20的免疫反应性.结果 经PCR扩增得到579 bp的目的基因片段,与预期大小一致;经菌落PCR及双酶切证明成功构建pET22b-HSP20原核表达载体;经可溶性分析r-HSP20主要存在于重组菌超声破碎上清中;经SDS-PAGE鉴定柱层析300 mmol/L咪唑洗脱的蛋白为高纯度r-HSP20;用该蛋白免疫获得的兔多克隆抗体效价为1:12 800,其抗体亚型IgG1及IgG2a含量分别为183.8 mg/ml和21.4 mg/ml;Western blot鉴定r-HSP20能被兔多克隆抗体识别.结论 成功构建pET-22b-HSP20原核表达载体,获得高纯度r-HSP20蛋白.抗体分型检测证明r-HSP20具有高效诱导体液免疫应答和细胞免疫应答的免疫原性,并具有良好的免疫反应性.
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