【摘 要】
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目的:研究结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)诱导小鼠树突状细胞株(DC2.4)凋亡及caspase-3、-8活化对凋亡的影响。方法:建立小鼠树突状细胞DC 2.4的人结核分枝杆
【机 构】
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嘉兴学院医学院病原生物学教研室,嘉兴市第二医院呼吸科
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目的:研究结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)诱导小鼠树突状细胞株(DC2.4)凋亡及caspase-3、-8活化对凋亡的影响。方法:建立小鼠树突状细胞DC 2.4的人结核分枝杆菌H37Rv细胞混合培养模型。采用DAPI荧光染色法和透射电镜分析凋亡DC 2.4细胞的形态特征;通过DNA琼脂糖凝胶电泳进行DNA片段化分析,FITC-Annexin V/PI荧光标记流式细胞术检测DC 2.4细胞凋亡情况;分光光度法检测H37Rv诱导DC 2.4细胞凋亡过程中caspase-3、-8活性变化。结果:H37Rv与DC 2.4细胞混合培养2 h后,即有细菌侵入,培养4、6、8、10、12 h后,细菌侵入现象更明显,侵入率分别为(16.1±4.3)%、(35.8±5.1)%、(50.2±5.7)%、(58.3±6.2)%和(65.9±6.9)%。H37Rv与DC 2.4细胞混合培养6 h后,DAPI染色荧光显微镜、透射电镜观察均发现DC 2.4细胞发生凋亡并出现典型的凋亡特征———染色质浓缩及边缘现象;DNA琼脂糖凝胶电泳出现特征性的凋亡条带。H37R与DC 2.4细胞混合培养6 h、12 h和24 h后,细胞凋亡率分别为(6.4±2.5)%,(11.8±5.3)%和(31.1±8.7)%。caspase-3、-8活性增高,caspase-3活性于10 h达高峰(2.01±0.09)U/μg,而caspase-8活性则在6 h达高峰(2.40±0.07)U/μg,两者与对照组相比均具有统计学意义(P<0.05),且caspase-8激活先于caspase-3。结论:结核分枝杆菌可诱导树突状细胞发生凋亡,其诱导凋亡的机制可能与caspase-3、-8活化有关。
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