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摘 要：目的：探究HPLC测定方法在对清开灵药物之中栀子苷含量进行测定的效果。方法：使用高效液相模式色谱仪器进行分析，设定检测波的波长数值为238纳米，在选择流动相的时候选乙腈和水的混合溶液作为流动相1.5米每分钟。探究结果：实验结果显示其精密度数值以及回收率数值显示良好，实验平均回收率达到了85.4%，RSD数值显示为1.49%。结论：使用这种检测方法能取得良好的实验结果，不但实验分析速度加快，且结果可靠，这种分析方法可以被用作清开灵药物中栀子苷含量的测定。
关键词：HPLC法；清开灵；栀子苷；含量测定
清开灵药物从其成分的角度分析来看，其主要的成分为胆酸药物、金银花药物、珍珠母药物、栀子药物、黄岑药物、水牛角药物，这种药物在临床治疗之中有着清热解毒、安神助眠的作用，能调节人的精神状态以及身心状态，同时对于上呼吸道部分的感染症状、病毒性感染情况、高热症情况都有良好的治疗效果。通过现代医学分析技术的进一步研究，发现清开灵药物之中影响药效的主要成分中的一种就是栀子物质，而这一物质含量方面测定的质量直接决定药物的生产质量，由此为了保证清开灵这种药物的质量，本文运用了HPLC法对药品之中的栀子苷物质的含量进行了进一步的分析，并且实际的分析中这种分析方式有着分离程度较高、重现性良好的特点，最终获得了较为良好的实验分析效果。
1 仪器以及药品
LC-10A型高效液相色谱仪，包括SPD-10AUV检测器，LC-10A色谱工作站（日本岛津公司）；栀子苷对照品（中国药品生物制品检定所提供），清开灵片样品（哈尔滨 圣泰制药股份有限公司，批号：20100506-1、20100506-2、20100506-3）。乙腈、甲醇为色谱纯。
2 方法以及结果
2.1 实验溶液的制备
2.1.1 对照作用溶液的制备。对照溶液在实验中起到了强化分析效果、丰富分析内容的作用，在制备环节之中首先技术人员要称量15.4毫克栀子苷药品的对照品，并将这些药品放入到50毫升的棕色试剂瓶中，之后向试剂瓶中逐渐加入甲醇溶液直到溶液高度达到了刻度线，将试剂瓶摇匀，从试剂瓶之中精确的称量出5毫升溶液，并将这5毫升溶液放入到100毫升的容量瓶之中，再次用甲醇溶液将其稀释到刻度线，充分的将溶液摇匀，最终所获得的溶液之中每毫升含栀子苷物质15.4微克。
2.1.2 实验溶液的配置。在进行精实验溶液配置的阶段中，直接拿取清开灵药物十片，将这些药物完全研磨、粉碎，并从研磨之后的粉末之中精准的称量出0.25克该粉末，将粉末放置到容积为25毫升的容量瓶之中，向其中倒入20毫升的甲醇溶液，并通过超声设备对其进行进一步的震荡处理，将震荡时间维持在30分钟左右。在完成了震荡操作之后将溶液静置降温至冷却，同时向其中加入甲醇溶液并稀释到刻度线，将其摇匀，使用微孔滤膜对其进行过滤。
2.1.3 阴性性质的样品溶液。在配置该药品的阶段中，按照药品的处方确定溶液的成分，并保证药物中含有除了栀子苷物质以外的所有药物，遵照药品加工方案制成不含栀子苷物质成分的清开灵药物，之后按照供试品物质的相应方法以及规定制备出。
2.2 实验色谱条件
在确定相应色谱条件的时候，根据实验特点以及实验要求选择C18色谱柱，将物质的检测波长设定为238纳米，选择流动相的时候选乙腈和水的混合溶液作为流动相1.5米每分钟，进样量10微升。取栀子苷对照品溶液、供试品溶液、阴性样品溶液分别注入液相色谱仪进行测定。供试品色谱图中，呈现与对照品保留时间相同的色谱峰，且基线平稳，分离度好，而阴性样品在此保留时间无色谱峰。
2.3 线性数值关系
在实验中分次精确的称取物质浓度数值为15.4微克每毫升的对照品溶液，0.2毫升、0.4毫升、0.6毫升、0.8毫升、1.0毫升，并将这些溶液放置容积为10毫升的容量瓶之中，并用甲醇溶液稀释容量瓶刻度线，在完成了溶液配置之后吸取这些溶液10微升分别注入到实验所用的分析仪器之中，进一步对峰面积数值进行确定。在进行后续研究分析的时候，以峰面积数值作为分析纵坐标，同时以栀子苷药物对照品物质进样量作为分析的表格的横坐标，最终绘制出相应的分析标准曲线。从分析结果方面来看当栀子苷物质的进样量数值在0.0604毫克到0.3010毫克之间的时候，能确保峰面积数值数值能有良好的線性关系。
2.4 精密度分析
选择不同批次的供试溶液，并按照上文所提到的分析方法进行重复性的分析实验，重复六次，进一步确定实验数据分析峰的面积数值，通过分析计算获得其RSD数值为0.92%，结果数据表明这一分析方法有良好的精密性。
2.5 稳定性试验
取供试品溶液，按上述色谱条件分别于0、2、4、6、8、10小时测定峰面积，计算其RSD值为0.99%。结果表明样品在10小时内稳定。
2.6 重复性试验
取清开灵片10克，研碎后混合均匀，精密称取样品5份，每份0.25克。按供试品溶液制备方法制备，依上述测定条件测定，并计算含量，结果平均含量为1.591毫克/克，RSD为1.21%。表明本法重复性好。
2.7 加样回收率试验
精密称取5份重复性试验项下的样品各0.1克，分别精密加入浓度为15.4μg/mL的栀子苷对照品溶液0.5ml，按供试品溶液制备方法制备供试品溶液，按上述色谱条件测定，平行2次，按下式计算回收率。
2.8 样品测定
分别精密吸取供试品溶液10微升，注入液相色谱仪，测定，按外标法计算样品中栀子苷的含量。三批清开灵片中栀子苷含量分别为：1.591毫克/克，1.498毫克/克和1.485毫克/克。
3 讨论
3.1 检测波长的确定
取浓度为30μg/ml的栀子苷对照品甲醇溶液，采用分光光度法在200～400nm的波长范围内进行紫外掃描，结果本品在237.5nm波长处有最大吸收。参照栀子含量测定项下方法及相关文献报道，确定栀子苷含量测定的检测波长为238nm。
3.2 超声提取时间的选择
参考有关文献报道，在制备供试品溶液时，取同一批号样品，以甲醇为溶剂超声提取10、20、30、40min，在同一色谱系统及色谱条件下试验，结果各样品的平均含量分别为0.435、0.449、0.494、0.496mg/片，表明20min时栀子苷基本提取完全，故确定超声提取时间为20min。
清开灵片由水牛角、黄芩苷、栀子、板蓝根等八味药组成，具有清热解毒，镇静安神。用于外感风热时毒、火毒内盛所致高热不退、烦躁不安、咽喉肿痛、舌质红绛、苔黄、脉数者；上呼吸道感染、病毒性感冒、急性化脓性扁桃体炎、急性咽炎、急性气管炎、高热等病症属上述证候者。
本实验建立的清开灵片中栀子苷的HPLC含量测定方法，经方法学验证结果表明，本法专属性好，灵敏度高，稳定性及重复性均符合含量测定要求，且操作简便。
参考文献
[1]中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准[S].中药成方制剂：第8册，1993：175.
[2]国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京：化学工业出版社，2005：173.
[3]刘宁.HPLC法测定解郁安神片中栀子苷的含量[J].中国药品标准，2008，9（6）：467-469.
[4]邵燕虹，宋丽莉，周燕双.HPLC法测定清热暗疮丸中栀子苷的含量[J].医学综述，2008，14（22）：3518-3519..
[5]张大军，王兆华.高效液相色谱法测定复肾宁片中栀子苷的含量[J].中国实验方剂学杂志，2010，16（12）：88-89.
关键词：HPLC法；清开灵；栀子苷；含量测定
清开灵药物从其成分的角度分析来看，其主要的成分为胆酸药物、金银花药物、珍珠母药物、栀子药物、黄岑药物、水牛角药物，这种药物在临床治疗之中有着清热解毒、安神助眠的作用，能调节人的精神状态以及身心状态，同时对于上呼吸道部分的感染症状、病毒性感染情况、高热症情况都有良好的治疗效果。通过现代医学分析技术的进一步研究，发现清开灵药物之中影响药效的主要成分中的一种就是栀子物质，而这一物质含量方面测定的质量直接决定药物的生产质量，由此为了保证清开灵这种药物的质量，本文运用了HPLC法对药品之中的栀子苷物质的含量进行了进一步的分析，并且实际的分析中这种分析方式有着分离程度较高、重现性良好的特点，最终获得了较为良好的实验分析效果。
1 仪器以及药品
LC-10A型高效液相色谱仪，包括SPD-10AUV检测器，LC-10A色谱工作站（日本岛津公司）；栀子苷对照品（中国药品生物制品检定所提供），清开灵片样品（哈尔滨 圣泰制药股份有限公司，批号：20100506-1、20100506-2、20100506-3）。乙腈、甲醇为色谱纯。
2 方法以及结果
2.1 实验溶液的制备
2.1.1 对照作用溶液的制备。对照溶液在实验中起到了强化分析效果、丰富分析内容的作用，在制备环节之中首先技术人员要称量15.4毫克栀子苷药品的对照品，并将这些药品放入到50毫升的棕色试剂瓶中，之后向试剂瓶中逐渐加入甲醇溶液直到溶液高度达到了刻度线，将试剂瓶摇匀，从试剂瓶之中精确的称量出5毫升溶液，并将这5毫升溶液放入到100毫升的容量瓶之中，再次用甲醇溶液将其稀释到刻度线，充分的将溶液摇匀，最终所获得的溶液之中每毫升含栀子苷物质15.4微克。
2.1.2 实验溶液的配置。在进行精实验溶液配置的阶段中，直接拿取清开灵药物十片，将这些药物完全研磨、粉碎，并从研磨之后的粉末之中精准的称量出0.25克该粉末，将粉末放置到容积为25毫升的容量瓶之中，向其中倒入20毫升的甲醇溶液，并通过超声设备对其进行进一步的震荡处理，将震荡时间维持在30分钟左右。在完成了震荡操作之后将溶液静置降温至冷却，同时向其中加入甲醇溶液并稀释到刻度线，将其摇匀，使用微孔滤膜对其进行过滤。
2.1.3 阴性性质的样品溶液。在配置该药品的阶段中，按照药品的处方确定溶液的成分，并保证药物中含有除了栀子苷物质以外的所有药物，遵照药品加工方案制成不含栀子苷物质成分的清开灵药物，之后按照供试品物质的相应方法以及规定制备出。
2.2 实验色谱条件
在确定相应色谱条件的时候，根据实验特点以及实验要求选择C18色谱柱，将物质的检测波长设定为238纳米，选择流动相的时候选乙腈和水的混合溶液作为流动相1.5米每分钟，进样量10微升。取栀子苷对照品溶液、供试品溶液、阴性样品溶液分别注入液相色谱仪进行测定。供试品色谱图中，呈现与对照品保留时间相同的色谱峰，且基线平稳，分离度好，而阴性样品在此保留时间无色谱峰。
2.3 线性数值关系
在实验中分次精确的称取物质浓度数值为15.4微克每毫升的对照品溶液，0.2毫升、0.4毫升、0.6毫升、0.8毫升、1.0毫升，并将这些溶液放置容积为10毫升的容量瓶之中，并用甲醇溶液稀释容量瓶刻度线，在完成了溶液配置之后吸取这些溶液10微升分别注入到实验所用的分析仪器之中，进一步对峰面积数值进行确定。在进行后续研究分析的时候，以峰面积数值作为分析纵坐标，同时以栀子苷药物对照品物质进样量作为分析的表格的横坐标，最终绘制出相应的分析标准曲线。从分析结果方面来看当栀子苷物质的进样量数值在0.0604毫克到0.3010毫克之间的时候，能确保峰面积数值数值能有良好的線性关系。
2.4 精密度分析
选择不同批次的供试溶液，并按照上文所提到的分析方法进行重复性的分析实验，重复六次，进一步确定实验数据分析峰的面积数值，通过分析计算获得其RSD数值为0.92%，结果数据表明这一分析方法有良好的精密性。
2.5 稳定性试验
取供试品溶液，按上述色谱条件分别于0、2、4、6、8、10小时测定峰面积，计算其RSD值为0.99%。结果表明样品在10小时内稳定。
2.6 重复性试验
取清开灵片10克，研碎后混合均匀，精密称取样品5份，每份0.25克。按供试品溶液制备方法制备，依上述测定条件测定，并计算含量，结果平均含量为1.591毫克/克，RSD为1.21%。表明本法重复性好。
2.7 加样回收率试验
精密称取5份重复性试验项下的样品各0.1克，分别精密加入浓度为15.4μg/mL的栀子苷对照品溶液0.5ml，按供试品溶液制备方法制备供试品溶液，按上述色谱条件测定，平行2次，按下式计算回收率。
2.8 样品测定
分别精密吸取供试品溶液10微升，注入液相色谱仪，测定，按外标法计算样品中栀子苷的含量。三批清开灵片中栀子苷含量分别为：1.591毫克/克，1.498毫克/克和1.485毫克/克。
3 讨论
3.1 检测波长的确定
取浓度为30μg/ml的栀子苷对照品甲醇溶液，采用分光光度法在200～400nm的波长范围内进行紫外掃描，结果本品在237.5nm波长处有最大吸收。参照栀子含量测定项下方法及相关文献报道，确定栀子苷含量测定的检测波长为238nm。
3.2 超声提取时间的选择
参考有关文献报道，在制备供试品溶液时，取同一批号样品，以甲醇为溶剂超声提取10、20、30、40min，在同一色谱系统及色谱条件下试验，结果各样品的平均含量分别为0.435、0.449、0.494、0.496mg/片，表明20min时栀子苷基本提取完全，故确定超声提取时间为20min。
清开灵片由水牛角、黄芩苷、栀子、板蓝根等八味药组成，具有清热解毒，镇静安神。用于外感风热时毒、火毒内盛所致高热不退、烦躁不安、咽喉肿痛、舌质红绛、苔黄、脉数者；上呼吸道感染、病毒性感冒、急性化脓性扁桃体炎、急性咽炎、急性气管炎、高热等病症属上述证候者。
本实验建立的清开灵片中栀子苷的HPLC含量测定方法，经方法学验证结果表明，本法专属性好，灵敏度高，稳定性及重复性均符合含量测定要求，且操作简便。
参考文献
[1]中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准[S].中药成方制剂：第8册，1993：175.
[2]国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京：化学工业出版社，2005：173.
[3]刘宁.HPLC法测定解郁安神片中栀子苷的含量[J].中国药品标准，2008，9（6）：467-469.
[4]邵燕虹，宋丽莉，周燕双.HPLC法测定清热暗疮丸中栀子苷的含量[J].医学综述，2008，14（22）：3518-3519..
[5]张大军，王兆华.高效液相色谱法测定复肾宁片中栀子苷的含量[J].中国实验方剂学杂志，2010，16（12）：88-89.