论文部分内容阅读
目的 探讨cAMP反应序列结合蛋白 (CREB蛋白 )在羊卵巢上皮细胞生长和凋亡中的作用。方法 将CREB蛋白基因转入腺病毒载体PACsk 2CMV ,将野生型的CREB蛋白 (CREBWT)和主要的非活性形式的CREB蛋白 (CREBS13 3A)表达载体腺病毒转染羊卵巢上皮细胞 ,Westernblotting检测CREB蛋白的表达 ;应用CellTiter 96Aqueous细胞生长分析仪测定细胞数目 ;Caspase 3/ 7活性分析仪测定Caspase的活性。结果 Westernblotting显示CREB蛋白表达载体腺病毒转染羊卵巢上皮细胞后 ,细胞表达CREB蛋白 ,且随着病毒浓度的增加 ,CREB蛋白的表达增强 ;CellTiter 96Aqueous测试结果显示 :当病毒浓度为 10 7~ 10 9/ml时 ,细胞数目增多 ;当病毒浓度为 10 10 /ml时 ,细胞数目明显减少 ,CREBS13 3A表达载体的作用比CREBWT和大肠杆菌乳糖操纵子Z(LacZ)明显 (P <0 0 5 ) ;Caspase 3/ 7活性测定显示 :当病毒浓度为 10 10 /ml时 ,经LacZ表达载体转染的羊卵巢上皮细胞Caspase 3/ 7酶活性增加 2~ 3倍 ,CREBWT增加 5倍 ,CREBS13 3A 增加 11倍 (P <0 0 5 )。结论 CREB蛋白的表达水平及CREB蛋白的磷酸化程度对卵巢上皮细胞的存活是非常重要的 ,CREB蛋白及其相关因子在卵巢上皮细胞的生长和凋亡中具有重要的作用。