目的 探讨细胞间黏附分子1(ICAM-1)基因转染对小鼠间充质干细胞(MSC)向脂肪细胞分化的影响。方法构建含小鼠ICAM-1基因全长DNA片段的MIGRl-ICAM-1重组逆转录病毒质粒,连同空质粒MIGRl及包装质粒ECOS分别转染T293细胞,收集相关病毒上清并感染小鼠MSC细胞系C3H10T1/2细胞,荧光倒置显微镜下观察及real.timePCR法和流式细胞术检测转染效率,将获得稳定过表达ICAM-1的C3H10T1/2细胞(C3H10T1/2-ICAM-1细胞)和转入空质粒的C3H10T1/2细胞(C3H10T1/2-MIGRl细胞)向脂肪细胞诱导分化,以原位油红O染色和real—timePCR检测成脂分化能力及其关键转录因子C/EBPoL和PPARy mRNA的表达水平。结果成功构建MIGRl-ICAM一1逆转录病毒载体;感染C3H10T1/2细胞获得稳定过表达ICAM-1的C3H10T1/2-ICAM-1细胞和空载体对照C3H10T1/2一MIGRl细胞。成脂细胞诱导分化结果显示,无论是在自分化还是诱导分化组中,C3H10T1/2-ICAM-1细胞与转染空载体的细胞相比脂滴变小,其脂肪细胞数量分别为[(3.2±0.5)/孔、(12.2±3.8)/孔],显著少于转染空载体的细胞[(11.2±0.4)/孔、(51.3±2.8)/孔](P〈0.05);C3H10T1/2一ICAM一1细胞自分化组和诱导分化组C/EBPoLmRNA表达水平分别为1.2±0.7和2.9±0.9);PPAR-,/mRNA表达水平分别为1557.6±70.2和7547.0±442.2,均较转染空载体细胞的5.8±0.5和23.0±2.3:2453.04-215.6和9856.3±542.2下调(P〈0.05)。结论细胞表面ICAM一1过表达可抑制小鼠MSC的成脂分化。
ICAM-1基因转染对小鼠问充质干细胞成脂分化功能的影响
【摘 要】
:
目的 探讨细胞间黏附分子1(ICAM-1)基因转染对小鼠间充质干细胞(MSC)向脂肪细胞分化的影响。方法构建含小鼠ICAM-1基因全长DNA片段的MIGRl-ICAM-1重组逆转录病毒质粒,连同空质粒MIGRl及包装质粒ECOS分别转染T293细胞,收集相关病毒上清并感染小鼠MSC细胞系C3H10T1/2细胞,荧光倒置显微镜下观察及real.timePCR法和流式细胞术检测转染效率,将获得稳定过表
【机 构】
:
天津医科大学总医院儿科,300052,军事医学科学院基础医学研究所,解放军第169医院检验科,军事医学科学院基础医学研究所,解放军第304医院神经外科,天津医科大学总医院儿科,300052,军事医学科
【出 处】
:
中华血液学杂志
【发表日期】
:
2013年34期
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