【摘 要】
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目的 制备和筛选在肝细胞膜特异性分布的单克隆抗体,并观察其与肝脏疾病的关系. 方法采用蔗糖与Percoll细胞分离液联合的密度梯度离心方法分离大鼠肝细胞膜膜小体,将提取的膜
【机 构】
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第四军医大学西京消化病医院肿瘤生物学重点实验室
【基金项目】
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国家自然科学基金;陕西省13115工程
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目的 制备和筛选在肝细胞膜特异性分布的单克隆抗体,并观察其与肝脏疾病的关系. 方法采用蔗糖与Percoll细胞分离液联合的密度梯度离心方法分离大鼠肝细胞膜膜小体,将提取的膜小体免疫BALB/c小鼠,利用单克隆抗体杂交瘤技术制备单克隆抗体,通过酶联免疫吸附试验及免疫组织化学方法检测抗体的效价及筛选在肝细胞膜特异性分布的单克隆抗体,利用免疫沉淀方法初步鉴定mh7抗原.选取四氯化碳损伤鼠模型及糖尿病模型鼠肝脏标本观察mh7抗原在病理状态下的表达变化并分析其病理意义. 结果应用蔗糖密度梯度离心方法成功提取到了大鼠肝细胞膜膜小体,免疫BALB/c小鼠后,制备了一批单克隆抗体.免疫组织化学结果显示,单克隆抗体mh7能特异性分布于肝细胞膜,同时在骨骼肌微血管内皮细胞亦有少量分布.免疫荧光及电镜结果亦显示mh7单克隆抗体特异性分布于肝细胞膜,从而证实mh7抗原为肝细胞膜特异性蛋白.mh7抗原相对分子质量约为200 000,且其抗原在四氯化碳损伤鼠肝细胞脂肪变性显著的区域表达明显低于其在正常区域的表达,在糖尿病模型鼠肝脏中的表达呈明显的区带分布. 结论我们获得了一株抗原表达在肝细胞膜,相对分子质量为200 000的特异性单克隆抗体,且该单克隆抗体的抗原仅在肝细胞膜及骨骼肌血管内皮细胞表达,并可能与肝脏疾病的发生密切相关.
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