【摘 要】
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为构建血红素氧合酶2(HO-2)真核表达载体pEF1α-HO-2-AcGFP,并观察其在小鼠脑血管内皮细胞中的表达情况.试验利用PCR技术从C57BL/6小鼠海马组织中扩增出HO-2基因cDNA序列,用
【机 构】
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徐州医学院神经生物研究中心,徐州医学院实验动物中心,扬州大学动科学院
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为构建血红素氧合酶2(HO-2)真核表达载体pEF1α-HO-2-AcGFP,并观察其在小鼠脑血管内皮细胞中的表达情况.试验利用PCR技术从C57BL/6小鼠海马组织中扩增出HO-2基因cDNA序列,用双酶切法将此序列克隆到真核表达载体pEF1α-IRES-AcGFP上,构建HO-2的真核表达载体pEF1α-HO-2-AcGFP,重组载体经EcoR I和BamH I双酶切和测序鉴定.电穿孔法转染小鼠脑血管内皮细胞,48 h后,实时定量PCR、Western blot检测HO-2在小鼠脑血管内皮细胞中mRNA和蛋白质水平的表达情况.结果表明,pEF1α-HO-2-AcGFP载体构建正确;重组载体转染小鼠脑血管内皮细胞后HO-2在mRNA水平表达量较空载体转染极显著增高(P＜0.01),在蛋白水平表达量较空载体转染显著增高(P＜0.05).表明HO-2基因的真核表达载体pEF1α-HO-2-AcGFP构建成功,为进一步研究其机制和功能奠定了基础.
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