本试验旨在研究二维和三维培养模式下奶牛乳腺上皮细胞形态及酪蛋白表达的差异。利用组织块培养细胞来分离奶牛乳腺上皮细胞,利用有限稀释法克隆奶牛乳腺上皮细胞。通过显微镜观察细胞在基质胶中的形态,并用Western blot法检测酪蛋白的诱导表达。结果表明:1)采用组织块培养细胞能够成功分离奶牛乳腺上皮细胞,克隆得到的细胞能稳定传至20代。2)细胞接种12h之后,二维培养的奶牛乳腺上皮细胞并没有形成明显的细胞簇,细胞间也没有相互连接;三维培养的奶牛乳腺上皮细胞形成明显的细胞簇,在基质胶内的层黏连蛋白作用下形成交织网状结构。培养2d细胞间交织网状结构逐渐消失,细胞开始形成单个的成细胞簇,使细胞间更加紧密的相连。3)二维培养奶牛乳腺上皮细胞不能诱导表达酪蛋白,但三维培养细胞可诱导表达κ-酪蛋白。综上所述,三维培养奶牛乳腺上皮细胞能够改变细胞的形态和功能,诱导κ-酪蛋白的表达,三维培养的奶牛乳腺上皮细胞可作为奶牛的泌乳机制研究的体外模型。