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目的探讨大鼠脑微血管周细胞的分离、培养和鉴定方法。方法10只3周龄Wstar 大鼠，无菌分离脑组织，采用2次酶消化和1次密度梯度离心法分离脑微血管片段，接种于35 mm培养皿进行原代培养。采用相差显微镜观察细胞形态，免疫荧光法鉴定α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）、神经元-胶质抗原2（neuron-glial antigen 2，NG2）、von Willebrand因子(von Willebrand factor，vWF)和胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein，GFAP）相关抗原，甲基噻唑基四唑法测定细胞生长曲线。结果周细胞从贴壁的脑微血管片段周围爬出，呈多角性，12～14 d后细胞融合95％。免疫荧光染色显示，周细胞分子标志物α-SMA和NG2相关抗原呈双阳性，vWF和GFAP 相关抗原呈双阴性，证实培养细胞为脑微血管周细胞。原代细胞初始生长速度较慢，传代细胞36～60h进入对数生长期，72～108 h生入平台期。结论该方法能成功分离出纯度较高的大鼠脑微血管周细胞。