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摘要:目的:为了探究助育汤对雷公藤所致的雄性小鼠生殖系统损伤的干预效果及作用机制。方法:取昆明雄性小鼠分为空白对照组,模型对照组和实验组三组。模型对照组和实验组持续给予雷公藤灌胃6周,建模成功即给予助育汤干预进行治疗,比较三组的精子数量,精子活性以及睾丸切片形态。结果:与对照组相比助育汤干预组的精子数量和精子活性显著增加,光镜下,睾丸曲细精管结构恢复正常,管腔饱满。结论:助育汤能够显著对抗雷公藤对雄性大鼠生殖系统的毒性作用。
关键词:雷公藤;生殖;雄性;助育汤
雷公藤是卫矛科一年生藤本植物,其主要成分是雷公藤甲素,是我国传统医学中的一种常用中草药。其性温,味苦涩,具有抗炎、免疫抑制、抗肿瘤、抗菌等活性[1]。长期以来应用于治疗风湿性关节炎,肾炎,红斑狼疮,血小板减少性紫癜等[2]自身免疫病及某些皮肤病,疗效显著。随着雷公藤在临床上的广泛使用,其伴随的副作用也日益受到关注。其中雷公藤抗生育效果较为显著,具有明显的抑精作用,口服雷公藤片可致男性生育能力下降,睾丸发育不全,精子减少,精子畸形[3],精子活力下降[4],严重限制了雷公藤在临床方面的使用。因此,研究如何减少雷公藤引起的雄性生殖系统损伤成为目前研究雷公藤的热点。
1 材料
1.1动物:健康昆明小鼠,雄性,每只小鼠体重在20g-25g,2d更换一次垫料。饲养温度 21~25℃,相对湿度21%~25%。实验期间动物自由摄食饮水。
1.2药物
雷公藤片:华润三九(黄石)药业有限公司,批准文号:国药准字Z42021534。助育汤由熟地15g,杞子15g,淮山药15g,楮实子15g,菟丝子15g,山萸肉10g,丹皮10g,淫羊藿12g,茯苓10g,泽泻23g组成,药材均购自养天和大药房。
2方法
2.1实验分组及处理
昆明雄性小鼠30只,适应性饲养一周,随机分为模型组(20只)与空白对照组(10只)。模型组连续灌服雷公藤片剂105mg/kg(相当于雷公藤甲素40μg/kg)(溶解后灌服混悬液),对照组灌服等量的生理盐水。6周后,模型组分为助育汤干预组(10只)和模型对照组(10只)。助育汤干预组灌服灌服雷公藤片剂105mg/kg+0.5ml助育汤,模型对照组灌服雷公藤片剂105mg/kg+等量的生理盐水。
2.2精子活性检测
小鼠服药6周后处死,取一侧睾丸约0.02g于0.9%氯化钠溶液中剪碎,静置5min涂片,计数200个精子中活动精子所占比例。
2.3精子数量检测
取右侧上1/4睾丸称重并置于1ml生理盐水中剪碎;超声波处理,生精上皮中除致密的长形精子细胞(15-19期)头外的其他细胞均被粉碎;血球计数器计数精子头的数量;根据公式计数每克睾丸组织所含的精子数。每克组织所含精子数量(个/克)=四大格精子头数量之和/4*稀释倍数*原液体积*10000/组织块重量。
2.4睾丸病理形态检测
取一侧睾丸在Bouin液中固定,石蜡切片,PAS染色,观察精曲小管的形状和管径,精曲小管的基底膜和界膜状态,精曲小管和间质之间的比列,精原细胞,间质细胞及精子细胞的产生和释放情况。
a.空白对照组。b.TPL组小鼠曲细精管管壁上生精细胞数量减少,少量曲细精管可见仅靠基膜的支持细胞及精原细胞,曲细精管内生精细胞部分或全部脱落,阻塞于官腔中,生精细胞排列紊乱,细胞间隙变大。c.助育汤干预组在生精细胞数量上有着明显的增加,支持细胞排列更加紧密,细胞紧密连接。
3讨论
鉴于雷公藤的生殖毒性显著限制其临床的应用,如何减轻其生殖毒性,有效解决它的使用安全问题,是进一步需要深入研究的。目前人们通过炮制去雷公藤根皮减轻其毒性,但近年来研究发现雷公藤根皮的有效成分雷公藤甲素含量较高,在减毒的同时,其疗效也将减弱。因此,雷公藤炮制减毒存在一定的局限性。配伍减毒是中医药在长期发展过程中形成的特色优势。配伍用药是中医遣药组方、辨证施治的主要形式和应用特点[5],近年来,雷公藤配伍减毒还未有系统研究。研究表明,助育汤对雷公藤所致的雄性小鼠生殖系统损伤干预有积极作用,本实验从“肾藏精,主生殖”等中医理论指导下,结合现代药理学,尽量减少毒性的情况下不削弱雷公藤的治疗效果。但是,通过对已有研究的分析与总结,发现目前研究还存在一定局限性,已有的研究大多不够系统和深入,关于遗传基因的研究还较少,而研究遗传基因的实验如何引起这些基因表达变化以及这些基因改变是怎样通过合成的蛋白质发挥作用的还需要进一步深入研究。因此明确中药解决雷公藤抗生育作用的机制还有待发展。
参考文献:
[1]马尾光,张滔,张超,等。有毒药物雷公藤的研究及展望.中华中医药杂志,2006,21(2):117-120.
[2]黄宝祥,朱培林,等。雷公藤的栽培与应用[J];江西林业科技,2012:187-188.
[3]张昕贤,张新志,林日阳,等.从内分泌激素改变研究补肾中药对雷公藤小鼠生殖功能的干预作用.辽宁中医药大学学报,2012,14(2):37-39.
[4] 覃俏峰。雷公藤的不良反應及中药配伍减毒分析.中国当代医药,2011,18(10):96-97.
[5] 段金廒,张伯礼,范欣生,张艳军,高月,林娜,钟赣生。中药配伍禁忌研究思路与技术体系框架[J]. 世界科学技术(中医药现代化),2012,14(03):1537-1546.
项目资助:
本项目受2017年度长沙医学院大学生创新性项目资助(长医教[2017]18号-277)
通讯作者:
唐亮,讲师,研究方向为生殖与遗传学。
关键词:雷公藤;生殖;雄性;助育汤
雷公藤是卫矛科一年生藤本植物,其主要成分是雷公藤甲素,是我国传统医学中的一种常用中草药。其性温,味苦涩,具有抗炎、免疫抑制、抗肿瘤、抗菌等活性[1]。长期以来应用于治疗风湿性关节炎,肾炎,红斑狼疮,血小板减少性紫癜等[2]自身免疫病及某些皮肤病,疗效显著。随着雷公藤在临床上的广泛使用,其伴随的副作用也日益受到关注。其中雷公藤抗生育效果较为显著,具有明显的抑精作用,口服雷公藤片可致男性生育能力下降,睾丸发育不全,精子减少,精子畸形[3],精子活力下降[4],严重限制了雷公藤在临床方面的使用。因此,研究如何减少雷公藤引起的雄性生殖系统损伤成为目前研究雷公藤的热点。
1 材料
1.1动物:健康昆明小鼠,雄性,每只小鼠体重在20g-25g,2d更换一次垫料。饲养温度 21~25℃,相对湿度21%~25%。实验期间动物自由摄食饮水。
1.2药物
雷公藤片:华润三九(黄石)药业有限公司,批准文号:国药准字Z42021534。助育汤由熟地15g,杞子15g,淮山药15g,楮实子15g,菟丝子15g,山萸肉10g,丹皮10g,淫羊藿12g,茯苓10g,泽泻23g组成,药材均购自养天和大药房。
2方法
2.1实验分组及处理
昆明雄性小鼠30只,适应性饲养一周,随机分为模型组(20只)与空白对照组(10只)。模型组连续灌服雷公藤片剂105mg/kg(相当于雷公藤甲素40μg/kg)(溶解后灌服混悬液),对照组灌服等量的生理盐水。6周后,模型组分为助育汤干预组(10只)和模型对照组(10只)。助育汤干预组灌服灌服雷公藤片剂105mg/kg+0.5ml助育汤,模型对照组灌服雷公藤片剂105mg/kg+等量的生理盐水。
2.2精子活性检测
小鼠服药6周后处死,取一侧睾丸约0.02g于0.9%氯化钠溶液中剪碎,静置5min涂片,计数200个精子中活动精子所占比例。
2.3精子数量检测
取右侧上1/4睾丸称重并置于1ml生理盐水中剪碎;超声波处理,生精上皮中除致密的长形精子细胞(15-19期)头外的其他细胞均被粉碎;血球计数器计数精子头的数量;根据公式计数每克睾丸组织所含的精子数。每克组织所含精子数量(个/克)=四大格精子头数量之和/4*稀释倍数*原液体积*10000/组织块重量。
2.4睾丸病理形态检测
取一侧睾丸在Bouin液中固定,石蜡切片,PAS染色,观察精曲小管的形状和管径,精曲小管的基底膜和界膜状态,精曲小管和间质之间的比列,精原细胞,间质细胞及精子细胞的产生和释放情况。
a.空白对照组。b.TPL组小鼠曲细精管管壁上生精细胞数量减少,少量曲细精管可见仅靠基膜的支持细胞及精原细胞,曲细精管内生精细胞部分或全部脱落,阻塞于官腔中,生精细胞排列紊乱,细胞间隙变大。c.助育汤干预组在生精细胞数量上有着明显的增加,支持细胞排列更加紧密,细胞紧密连接。
3讨论
鉴于雷公藤的生殖毒性显著限制其临床的应用,如何减轻其生殖毒性,有效解决它的使用安全问题,是进一步需要深入研究的。目前人们通过炮制去雷公藤根皮减轻其毒性,但近年来研究发现雷公藤根皮的有效成分雷公藤甲素含量较高,在减毒的同时,其疗效也将减弱。因此,雷公藤炮制减毒存在一定的局限性。配伍减毒是中医药在长期发展过程中形成的特色优势。配伍用药是中医遣药组方、辨证施治的主要形式和应用特点[5],近年来,雷公藤配伍减毒还未有系统研究。研究表明,助育汤对雷公藤所致的雄性小鼠生殖系统损伤干预有积极作用,本实验从“肾藏精,主生殖”等中医理论指导下,结合现代药理学,尽量减少毒性的情况下不削弱雷公藤的治疗效果。但是,通过对已有研究的分析与总结,发现目前研究还存在一定局限性,已有的研究大多不够系统和深入,关于遗传基因的研究还较少,而研究遗传基因的实验如何引起这些基因表达变化以及这些基因改变是怎样通过合成的蛋白质发挥作用的还需要进一步深入研究。因此明确中药解决雷公藤抗生育作用的机制还有待发展。
参考文献:
[1]马尾光,张滔,张超,等。有毒药物雷公藤的研究及展望.中华中医药杂志,2006,21(2):117-120.
[2]黄宝祥,朱培林,等。雷公藤的栽培与应用[J];江西林业科技,2012:187-188.
[3]张昕贤,张新志,林日阳,等.从内分泌激素改变研究补肾中药对雷公藤小鼠生殖功能的干预作用.辽宁中医药大学学报,2012,14(2):37-39.
[4] 覃俏峰。雷公藤的不良反應及中药配伍减毒分析.中国当代医药,2011,18(10):96-97.
[5] 段金廒,张伯礼,范欣生,张艳军,高月,林娜,钟赣生。中药配伍禁忌研究思路与技术体系框架[J]. 世界科学技术(中医药现代化),2012,14(03):1537-1546.
项目资助:
本项目受2017年度长沙医学院大学生创新性项目资助(长医教[2017]18号-277)
通讯作者:
唐亮,讲师,研究方向为生殖与遗传学。