可注射RGD功能化的透明质酸果胶水凝胶促进体外成软骨的研究

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目的研究基于透明质酸(HA)-己二酸二酰肼(ADH)/RGD寡肽功能化果胶(PAD)的可注射HA-ADH/PADRGD水凝胶体系的软骨形成作用。方法采用腙交联法合成水凝胶。通过分析HA-ADH与PAD-RGD不同质量比(8∶2、6∶4、4∶6)HA-ADH/PAD-RGD水凝胶的形态学、凝胶时间、力学强度、降解时间、细胞增殖和软骨作用等因素,综合评价该水凝胶的特性。结果质量比从8∶2减小到6∶4和4∶6时,水凝胶时间从(132.8±4.8)s分别增加到(188.7±10.1)s和(328.9±12.6)s(P<0.01),平衡溶胀比(ESR)从32.8±1.5分别依次增大到34.8±2.3和36.4±1.9(P<0.01)。经过49d降解后,8∶2、6∶4、4∶6质量比组水凝胶的剩余质量比依次为85.3%、73.5%和55.9%。另外,随着质量比减小,水凝胶的力学强度不断减小。培养1d后8∶2、6∶4、4∶6质量比组水凝胶的dsDNA含量分别为(0.7±0.1)μg、(0.6±0.1)μg、(0.6±0.1)μg(P>0.05)。培养21d后,6∶4组水凝胶dsDNA含量为(1.9±0.2)μg明显高于8∶2组[(1.6±0.1)μg,P<0.05]和4∶6组[(1.5±0.1)μg,P<0.05]。6∶4组水凝胶Ⅱ型胶原基因的表达为2.3±0.2明显高于8∶2组(1.3±0.2,P<0.05)和4∶6组(1.0±0.1,P<0.05)。6∶4组糖胺聚糖(GAG)产生量为(16.5±1.4)μg明显高于8∶2组[(9.1±1.4)μg,P<0.05]和4∶6组[(8.8±1.0)μg,P<0.05]。包裹在6∶4组水凝胶中软骨细胞胶原Ⅱ型免疫着色的细胞百分比为(83.7±15.7)%,明显高于8∶2组[(53.3±9.2)%,P<0.05]和4∶6组[(43.9±7.8)%,P<0.05]。结论 HA-ADH/PAD-RGD水凝胶具有适宜的凝胶时间,力学强度,良好的组织相容性和细胞相容性,并能增强软骨细胞增殖,维持软骨细胞表型。不同质量比HA-ADH/PAD-RGD水凝胶具有不同性质,6∶4质量比水凝胶具有最好的物理化学和生物学性质。
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