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摘要：以GH和基因作为影响鸡繁殖性状的候选基因，采用PCR-SSCP方法检测仙居鸡GH基因外显子4和[WTBX]基因外显子3区域的单核苷酸多态性，并分析GH单基因型及2个基因合并基因型与65周龄产蛋数的关联。结果表明：GH基因exon4（C2338G/C2341T）的突变和基因exon2的突变（C826T）基因型CC型与该鸡品种的65周龄产蛋数显著相关（P<0.05），AA、CC型对产蛋数的加性效应分别为3.56、3.60；合并基因型AACC型个体65周龄产蛋数与对照组相比差异显著（P<0.05）；2个基因间的互作效应不显著（P>0.05）。
关键词：GH基因]基因；仙居鸡；基因合并；产蛋数
中图分类号： S831.2文献标志码：
文章编号：1002-1302（2016）08-0300-03
仙居鸡原产于浙江省台州市仙居县、临海市等地，是我国优良蛋用鸡品种。仙居鸡具有单冠、颈部细长、背部平直、尾羽高翘、羽毛紧密等特点，体型虽小但很健壮。公鸡羽毛呈黄色或红色，体质量约为1.5 kg；母鸡羽毛多呈黄色，少呈黑色或花色，体质量约为1 kg，500日龄产蛋数为180～200枚。仙居鸡存在体质量小、繁殖性能不高的缺点，寻找与仙居鸡繁殖性能相关的候选基因，实施分子标记辅助选择是提高其产蛋数的有效途径。
生长激素（growth hormone，GH）是促进机体新陈代谢、提高动物瘦肉率、降低脂肪沉积的一种激素，主要由脑垂体分泌，通过与生长激素受体（growth hormone receptor，GHR）结合，并通过类胰岛素生长因子（insulin-like growth factors，IGFs）的媒介作用来促进细胞的增生与分化[1]。GH编码的基因全长3 901 bp，包括4个内含子和5个外显子，编码191个氨基酸[2]。GH基因变异会影响家畜家禽生长发育、繁殖及其他生产性状，此项研究越来越受到人们的关注。
细胞视黄醇结合蛋白（cellular retionol-binding proteins，CRBPs）担任着转运维生素A（视黄醇）的任务，维生素A主要参与机体的视觉、胚胎发育、繁殖、细胞增殖与分化、脂类代谢等生理过程。畜禽机体自身不能直接合成维生素A，必须通过食物间接获取。缺乏维生素A会影响鸡的体质量、饲料利用率、产蛋力、蛋质量、蛋品质、孵化率、免疫应答[3]；因此，细胞视黄醇结合蛋白参与视觉、繁殖、上皮细胞的维持、骨的生长发育等诸多生物学过程。鸡的细胞视黄醇结合蛋白CRBPs共有4种，CRBP4是其中重要的一种，鸡的[WTBX][STBX]CRBP4[WTBZ][STBZ]基因位于21号染色体，有3个外显子[4]。
合并基因型在植物育种中已得到应用并取得了良好效果[5]，在动物育种中也有报道。刘婵娟等研究表明，ESR和FSH基因的合并基因型对地方猪种初产、经产胎次的产仔数具有显著影响[6]。在家禽育种上，洪坤月等采用PCR-SSCP法对太湖鸡促卵泡激素β亚基（FSH-β）基因、生长素（GH）及其受体基因（GHR）进行多态性检测，结果发现产蛋量较高的合并基因型AADD可作为太湖鸡选育的参考[7]。于吉英等对NPY、ESR基因的联合效应进行分析，结果表明，合并基因型AAAC的300日龄产蛋数、400日龄产蛋数、平均连产时间均最高[8]。李俊营等对淮南麻黄鸡[WTBX][STBX]CRBP4[WTBZ][STBZ]基因多态性与早期产蛋性状、蛋品质的相关性进行分析，结果表明，
3结论与讨论
近年来，动物基因组的研究迅速发展，基因转移、基因聚合等现代分子生物技术手段的应用使分子标记辅助选择（MAS）广泛应用于动植物的遗传改良，并取得了长足的进展。传统育种方法通过表现型间接对基因型进行选择，普遍存在选育效率低、周期长的缺点。本研究将传统方法与分子标记辅助选择相结合，以期获得更好的育种效果。
通过分析仙居鸡群体[WTBX][STBX]CRBP4[WTBZ][STBZ]和GH标记2个基因各基因型与产蛋数的关联，确定了[WTBX][STBX]CRBP4[WTBZ][STBZ]和GH的有利单个基因型为AA、CC型，其在仙居鸡群体中的分布比例分别达30%、34%，且GH、[WTBX][STBX]CRBP4[WTBZ][STBZ]基因对65周龄产蛋数均一致表现为正加性效应与负显性效应，A、C 2个等位基因位点对65周龄产蛋数表现为负效应。在9种合并基因型中，只有单基因合并后的AACC基因型个体的65周龄产蛋数显著高于其他组合合并基因型个体，分别比GH单基因AA型、[WTBX][STBX]CRBP4[WTBZ][STBZ]单基因CC型的产蛋数提高了2.57、1.91枚，但差异均未达到显著水平（P<0.05）。2种优势单基因型间的互作效应并不显著（P>0.05），与单基因型相比，合并基因型对产蛋数的主效作用（Eta2GH×[WTBX][STBX]CRBP4[WTBZ][STBZ] 通过分子标记手段对与产蛋数关联的[WTBX][STBX]CRBP4[WTBZ][STBZ]、GH基因优势单基因型進行基因合并育种，能使仙居鸡的产蛋数有所提高，為基因合并在家禽育种中的进一步应用提供依据。
参考文献：
[1]Scanes C G，Proudman J A，Radecki S V. Influence of continuous growth hormone or insulin-like growth factor Ⅰ administration in adult female chickens[J]. General and Comparative Endocrinology，1999，114（3）：315-323. [2]Lamb I C，Galehouse D M，Foster D N. Chicken growth hormone cDNA sequence[J]. Nucleic Acids Research，1988，16（19）：9339.
[3]de Baere E，Speleman F，van Roy N，et al. Assignment of thecellular retinol-binding protein 2 gene（[WTBX][STBX]RBP7[WTBZ][STBZ]）to human chromosome band 3q23 by insitu hybridization[J]. Cytogenetics and Cell Genetics，1998，83（3/4）：240.
[4]肖禮华. 鸡CRBPs基因家族克隆表达及其与繁殖性状的关联分析[D]. 雅安：四川农业大学，2011.
[5]刘志文，傅延栋，刘雪萍，等. 作物分子标记辅助选择的研究进展影响因素及其发展策略[J]. 植物学通报，2005，22（8）：89-92.
[6][JP3]刘婵娟，曾勇庆，魏述东，等. 8个猪种ESR和FSHβ基因合并基因型與繁殖性状关系的研究[J]. 畜牧兽医学报，2009，40（3）：291-295.
[7][JP3]洪坤月，汪峰，虞得兵，等. 太湖鸡PRL、PRIR和FSHβ基因多态与前期产蛋性状关系研究[J]. 西北农业学报，2007，16（5）：11-14.
[8]于吉英，陈宽维，肖小军，等. ESR、[WTBX][STBX]POU1F1[WTBZ][STBZ]基因对文昌鸡繁殖性状的遗传效应分析[J]. 畜牧与兽医，2008，40（4）：49-51.
[9]李俊营，詹凯，刘伟，等. 淮南麻黄鸡[WTBX][STBX]CRBP4[WTBZ][STBZ]基因多态性与早期产蛋性状和蛋品质的相关性[J]. 畜牧兽医学报，2013，44（2）：197-203.[ZK）]
[10]张学余，李国辉，韩 威，等. PRL和[WTBX][STBX]POU1F1[WTBZ][STBZ]基因及基因聚合对白耳鸡产蛋数的效应分析[J]. 安徽农业大学学报，2010，37（2）：249-252.
关键词：GH基因]基因；仙居鸡；基因合并；产蛋数
中图分类号： S831.2文献标志码：
文章编号：1002-1302（2016）08-0300-03
仙居鸡原产于浙江省台州市仙居县、临海市等地，是我国优良蛋用鸡品种。仙居鸡具有单冠、颈部细长、背部平直、尾羽高翘、羽毛紧密等特点，体型虽小但很健壮。公鸡羽毛呈黄色或红色，体质量约为1.5 kg；母鸡羽毛多呈黄色，少呈黑色或花色，体质量约为1 kg，500日龄产蛋数为180～200枚。仙居鸡存在体质量小、繁殖性能不高的缺点，寻找与仙居鸡繁殖性能相关的候选基因，实施分子标记辅助选择是提高其产蛋数的有效途径。
生长激素（growth hormone，GH）是促进机体新陈代谢、提高动物瘦肉率、降低脂肪沉积的一种激素，主要由脑垂体分泌，通过与生长激素受体（growth hormone receptor，GHR）结合，并通过类胰岛素生长因子（insulin-like growth factors，IGFs）的媒介作用来促进细胞的增生与分化[1]。GH编码的基因全长3 901 bp，包括4个内含子和5个外显子，编码191个氨基酸[2]。GH基因变异会影响家畜家禽生长发育、繁殖及其他生产性状，此项研究越来越受到人们的关注。
细胞视黄醇结合蛋白（cellular retionol-binding proteins，CRBPs）担任着转运维生素A（视黄醇）的任务，维生素A主要参与机体的视觉、胚胎发育、繁殖、细胞增殖与分化、脂类代谢等生理过程。畜禽机体自身不能直接合成维生素A，必须通过食物间接获取。缺乏维生素A会影响鸡的体质量、饲料利用率、产蛋力、蛋质量、蛋品质、孵化率、免疫应答[3]；因此，细胞视黄醇结合蛋白参与视觉、繁殖、上皮细胞的维持、骨的生长发育等诸多生物学过程。鸡的细胞视黄醇结合蛋白CRBPs共有4种，CRBP4是其中重要的一种，鸡的[WTBX][STBX]CRBP4[WTBZ][STBZ]基因位于21号染色体，有3个外显子[4]。
合并基因型在植物育种中已得到应用并取得了良好效果[5]，在动物育种中也有报道。刘婵娟等研究表明，ESR和FSH基因的合并基因型对地方猪种初产、经产胎次的产仔数具有显著影响[6]。在家禽育种上，洪坤月等采用PCR-SSCP法对太湖鸡促卵泡激素β亚基（FSH-β）基因、生长素（GH）及其受体基因（GHR）进行多态性检测，结果发现产蛋量较高的合并基因型AADD可作为太湖鸡选育的参考[7]。于吉英等对NPY、ESR基因的联合效应进行分析，结果表明，合并基因型AAAC的300日龄产蛋数、400日龄产蛋数、平均连产时间均最高[8]。李俊营等对淮南麻黄鸡[WTBX][STBX]CRBP4[WTBZ][STBZ]基因多态性与早期产蛋性状、蛋品质的相关性进行分析，结果表明，
3结论与讨论
近年来，动物基因组的研究迅速发展，基因转移、基因聚合等现代分子生物技术手段的应用使分子标记辅助选择（MAS）广泛应用于动植物的遗传改良，并取得了长足的进展。传统育种方法通过表现型间接对基因型进行选择，普遍存在选育效率低、周期长的缺点。本研究将传统方法与分子标记辅助选择相结合，以期获得更好的育种效果。
通过分析仙居鸡群体[WTBX][STBX]CRBP4[WTBZ][STBZ]和GH标记2个基因各基因型与产蛋数的关联，确定了[WTBX][STBX]CRBP4[WTBZ][STBZ]和GH的有利单个基因型为AA、CC型，其在仙居鸡群体中的分布比例分别达30%、34%，且GH、[WTBX][STBX]CRBP4[WTBZ][STBZ]基因对65周龄产蛋数均一致表现为正加性效应与负显性效应，A、C 2个等位基因位点对65周龄产蛋数表现为负效应。在9种合并基因型中，只有单基因合并后的AACC基因型个体的65周龄产蛋数显著高于其他组合合并基因型个体，分别比GH单基因AA型、[WTBX][STBX]CRBP4[WTBZ][STBZ]单基因CC型的产蛋数提高了2.57、1.91枚，但差异均未达到显著水平（P<0.05）。2种优势单基因型间的互作效应并不显著（P>0.05），与单基因型相比，合并基因型对产蛋数的主效作用（Eta2GH×[WTBX][STBX]CRBP4[WTBZ][STBZ]
参考文献：
[1]Scanes C G，Proudman J A，Radecki S V. Influence of continuous growth hormone or insulin-like growth factor Ⅰ administration in adult female chickens[J]. General and Comparative Endocrinology，1999，114（3）：315-323. [2]Lamb I C，Galehouse D M，Foster D N. Chicken growth hormone cDNA sequence[J]. Nucleic Acids Research，1988，16（19）：9339.
[3]de Baere E，Speleman F，van Roy N，et al. Assignment of thecellular retinol-binding protein 2 gene（[WTBX][STBX]RBP7[WTBZ][STBZ]）to human chromosome band 3q23 by insitu hybridization[J]. Cytogenetics and Cell Genetics，1998，83（3/4）：240.
[4]肖禮华. 鸡CRBPs基因家族克隆表达及其与繁殖性状的关联分析[D]. 雅安：四川农业大学，2011.
[5]刘志文，傅延栋，刘雪萍，等. 作物分子标记辅助选择的研究进展影响因素及其发展策略[J]. 植物学通报，2005，22（8）：89-92.
[6][JP3]刘婵娟，曾勇庆，魏述东，等. 8个猪种ESR和FSHβ基因合并基因型與繁殖性状关系的研究[J]. 畜牧兽医学报，2009，40（3）：291-295.
[7][JP3]洪坤月，汪峰，虞得兵，等. 太湖鸡PRL、PRIR和FSHβ基因多态与前期产蛋性状关系研究[J]. 西北农业学报，2007，16（5）：11-14.
[8]于吉英，陈宽维，肖小军，等. ESR、[WTBX][STBX]POU1F1[WTBZ][STBZ]基因对文昌鸡繁殖性状的遗传效应分析[J]. 畜牧与兽医，2008，40（4）：49-51.
[9]李俊营，詹凯，刘伟，等. 淮南麻黄鸡[WTBX][STBX]CRBP4[WTBZ][STBZ]基因多态性与早期产蛋性状和蛋品质的相关性[J]. 畜牧兽医学报，2013，44（2）：197-203.[ZK）]
[10]张学余，李国辉，韩 威，等. PRL和[WTBX][STBX]POU1F1[WTBZ][STBZ]基因及基因聚合对白耳鸡产蛋数的效应分析[J]. 安徽农业大学学报，2010，37（2）：249-252.