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摘要：本文通过阐述研究西南某气田的大气对该气田常见绿色植物叶片叶绿素总含量（Ct）的影响。通过实验研究对比发现，污染严重的是某厂区周边区域几个大气采样点，栽种的植物叶片叶绿素总含量Ct较低；无污染的对照區域，其叶绿素总含量Ct较高。通过数据分析，不同污染地点植物的叶绿素含量随着污染程度加剧而减少。
关键词： 叶绿素 萝卜叶 测定方法
中图分类号：TQ611.5
1、前言：
S02等气体通过气孔进入叶肉细胞后产生水合作用，形成了S032-的形式，具有很强的细胞毒性。迄今，从全球范畴来看，由各种污染源排放出来的大气污染物，及其此生产物对生物有机体的生命活动已产生不可忽视的影响。至少有一半以上的人口生活在S02浓度超标准的环境之中，与人共存的植物也受到类似的影响。随着普光气田的迅速发展，对能源的极大需求加剧了它的大气污染。
1.1 叶绿素的概念应用
叶绿素，是地球上与光合作用（photosynthesis）有关的最重要的光合色素。位于类囊体膜，叶绿素吸收大部分的红光和紫光但反射绿光，所以叶绿素呈现绿色，它在光合作用的光吸收中起核心作用。光合作用是通过合成一些有机化合物将光能转变为化学能的过程。
叶绿素是绿色植物光合作用的基础物质，可反映植物的生长发育情况、生理代谢变化以及营养状况，并且可作为环境生理研究的参考指标。由于其对周围的植物和农作物很敏感，并与植物的光合作用、营养吸收等密切相关，被广泛作为植物生长的常规测定指标项目。因此研究叶绿素含量的测定意义重大。
1.2 叶绿素的分类：
高等植物叶绿体中的叶绿素主要有叶绿素a 和叶绿素b 两种。它们不溶于水，而溶于有机溶剂，如乙醇、丙酮、乙醚、氯仿等。
2、样品采集及保存
2.1样地选择
选择两块样地，其中一个样地要选择在无污染区域，空气清新，大气干净。另选一块样地在普光气田附近，污染区域内。
2.2 样品采集
在选中的菜地中，采集具有代表性的植物，当年新生鲜萝卜叶片或水稻叶片作为样本，尽量采集上部叶片，叶片形状和大小基本相同，要求每个样地、每个样本采集6组叶片作为重复，于同一天的上午9点左右采集，采集植物的上部功能叶为材料。
2.3 样品保存
先用毛笔或者用毛刷清除叶片表面的灰尘，置于带冰块的盒中，带回实验室，存放于4℃冰箱中，再进行植物叶片叶绿素（a、b）含量（Ca、Cb）的测定和分析。
3、检测方法优化
叶绿素的测定方法很多种，其中主要有：
（1）、原子吸收光谱法：通过测定镁元素的含量，进而间计算叶绿素的含量。
（2）、分光光度法：利用分光光度计测定叶绿素提取液在最大吸收波长下的吸光值，即可用朗伯-比尔定律计算出提取液中叶绿素的含量。
叶绿素a和叶绿素b在645nm和663nm处有最大的吸收，并且两吸收曲线相交于652nm处。因此测定提取液在645nm、663nm和652nm波长下的吸光值，依据公式分别计算出叶绿素a、叶绿素b和总叶绿素的含量。
（3）、光声光谱法：光声光谱法作为一种新兴检测技术广泛应用在各们学科的研究中。其无需制样或稍加制样，即可简便的加以检测。生物试样光声光谱研究近年来有所明显的增长。它是直接探测无辐射跃迁过程的唯一手段，光声光谱技术本身特点使它能胜任传统光谱技术难于完成的某些工作。
3.1检测方法
分光光度计法，双波长方式，实验室目前普遍采用这种方法。
（1）材料：新鲜的植物叶片和烟熏过的叶片。
（2）仪器：分光光度计、25毫升比色管、漏斗、研钵、玻璃棒、滤纸、天平（感量百分之一）等。
（3）试剂：80%乙醇、CaC03和石英砂。
3.2 操作步骤
（1）色素提取：取新鲜植物叶片，擦净组织表面的污物，避开大的中脉或去除中脉再剪碎，剪成1mm宽的细丝，用电子天平准确称取剪碎后的植物样本新鲜叶片0.1g，混匀，无损的放置在研钵中，加入少许碳酸钙、石英砂和80%的乙醇，充分混合研磨，研磨成匀浆，研磨至组织变白，暗处静止3-5min。用一层干虑纸过滤，先用乙醇湿润，沿玻璃棒把提取液倒入漏斗，滤液放入25毫升比色管中，用滴管吸取80%的乙醇将研体和玻璃棒反复洗净，清洗液也要过滤到比色管中。再用80%乙醇洗涤残渣数次，滤纸至无绿色，合并滤液，定容到刻度，摇匀。
（2）读取吸光度：取1cm的洁净比色皿，不要用手接触比色皿的光面，先用少量色素提取液清洗比色皿3次，然后再将色素提取液倒进比色皿中，液面高度约为比色皿高度的4/5，并用滤纸洗掉比色皿外围多余的提取液，最后用擦镜纸擦干净整个比色皿。把比色皿放进比色皿架上，第一个位置放盛有80%乙醇做空白对照，将仪器波长分别调到663nm、645nm处，以80%乙醇作为空白对照调透光率100%，分别测定其光密度。
3.3 实验结果计算
按照下列Arnon公式计算材料中叶绿素a、b及叶绿素的总含量。
Chla含量（mg g-1）=（12.7OD663-2.69OD645）
Chlb含量（mg g-1）=（22.9OD645-4.68OD663）
比较分析不同植物的叶绿素含量差异及同种植物在不同生长环境下 Chla/Chlb的差异。
3.4 注意事项：
（1）叶绿素提取准备工作要在半暗房间进行，温度保持在25°C；
（2）叶绿素提取液不能浑浊，一定要提取干净，避免造成测定时的误差，；
（3）提取叶绿体中色素的关键是：叶片要新鲜，研磨时间要短些；
（4）初提液体积不易过多，以免浪费试剂，但是浓度高的情况下可适当进行稀释；
4、结论
叶绿素的含量变化与植物生长发育状况以及环境变化密切相关，由于试验材料的差异以及实验中使用的分光光度计性能的不同，导致实验研究过程中测得的叶绿素含量等结果之间存在很大的差异，特别是Chla/Chlb的相对比值差异更大。因此要使用具有波长自动校准功能、波长精度较高的双光束分光光度计，这样实际测得的Chla/Chlb的相对比值不仅与相应的理论值接近，而且叶绿素定量结果之间也有较好的可比性和重现性。
参考文献
[1].刘秀丽，宋平，孙成明（1999）.植物叶绿素测定方法的再探讨.江苏农业研究，20 （3）：46-47
[2].王学奎（1983）植物生理生化实验原理和技术（第二版）.北京：高等教育出版社，134-136
[3].张如美，孙晓斌.对叶绿素方法测定的改进[J]环境监测管理与技术，2002，15（2）：31
关键词： 叶绿素 萝卜叶 测定方法
中图分类号：TQ611.5
1、前言：
S02等气体通过气孔进入叶肉细胞后产生水合作用，形成了S032-的形式，具有很强的细胞毒性。迄今，从全球范畴来看，由各种污染源排放出来的大气污染物，及其此生产物对生物有机体的生命活动已产生不可忽视的影响。至少有一半以上的人口生活在S02浓度超标准的环境之中，与人共存的植物也受到类似的影响。随着普光气田的迅速发展，对能源的极大需求加剧了它的大气污染。
1.1 叶绿素的概念应用
叶绿素，是地球上与光合作用（photosynthesis）有关的最重要的光合色素。位于类囊体膜，叶绿素吸收大部分的红光和紫光但反射绿光，所以叶绿素呈现绿色，它在光合作用的光吸收中起核心作用。光合作用是通过合成一些有机化合物将光能转变为化学能的过程。
叶绿素是绿色植物光合作用的基础物质，可反映植物的生长发育情况、生理代谢变化以及营养状况，并且可作为环境生理研究的参考指标。由于其对周围的植物和农作物很敏感，并与植物的光合作用、营养吸收等密切相关，被广泛作为植物生长的常规测定指标项目。因此研究叶绿素含量的测定意义重大。
1.2 叶绿素的分类：
高等植物叶绿体中的叶绿素主要有叶绿素a 和叶绿素b 两种。它们不溶于水，而溶于有机溶剂，如乙醇、丙酮、乙醚、氯仿等。
2、样品采集及保存
2.1样地选择
选择两块样地，其中一个样地要选择在无污染区域，空气清新，大气干净。另选一块样地在普光气田附近，污染区域内。
2.2 样品采集
在选中的菜地中，采集具有代表性的植物，当年新生鲜萝卜叶片或水稻叶片作为样本，尽量采集上部叶片，叶片形状和大小基本相同，要求每个样地、每个样本采集6组叶片作为重复，于同一天的上午9点左右采集，采集植物的上部功能叶为材料。
2.3 样品保存
先用毛笔或者用毛刷清除叶片表面的灰尘，置于带冰块的盒中，带回实验室，存放于4℃冰箱中，再进行植物叶片叶绿素（a、b）含量（Ca、Cb）的测定和分析。
3、检测方法优化
叶绿素的测定方法很多种，其中主要有：
（1）、原子吸收光谱法：通过测定镁元素的含量，进而间计算叶绿素的含量。
（2）、分光光度法：利用分光光度计测定叶绿素提取液在最大吸收波长下的吸光值，即可用朗伯-比尔定律计算出提取液中叶绿素的含量。
叶绿素a和叶绿素b在645nm和663nm处有最大的吸收，并且两吸收曲线相交于652nm处。因此测定提取液在645nm、663nm和652nm波长下的吸光值，依据公式分别计算出叶绿素a、叶绿素b和总叶绿素的含量。
（3）、光声光谱法：光声光谱法作为一种新兴检测技术广泛应用在各们学科的研究中。其无需制样或稍加制样，即可简便的加以检测。生物试样光声光谱研究近年来有所明显的增长。它是直接探测无辐射跃迁过程的唯一手段，光声光谱技术本身特点使它能胜任传统光谱技术难于完成的某些工作。
3.1检测方法
分光光度计法，双波长方式，实验室目前普遍采用这种方法。
（1）材料：新鲜的植物叶片和烟熏过的叶片。
（2）仪器：分光光度计、25毫升比色管、漏斗、研钵、玻璃棒、滤纸、天平（感量百分之一）等。
（3）试剂：80%乙醇、CaC03和石英砂。
3.2 操作步骤
（1）色素提取：取新鲜植物叶片，擦净组织表面的污物，避开大的中脉或去除中脉再剪碎，剪成1mm宽的细丝，用电子天平准确称取剪碎后的植物样本新鲜叶片0.1g，混匀，无损的放置在研钵中，加入少许碳酸钙、石英砂和80%的乙醇，充分混合研磨，研磨成匀浆，研磨至组织变白，暗处静止3-5min。用一层干虑纸过滤，先用乙醇湿润，沿玻璃棒把提取液倒入漏斗，滤液放入25毫升比色管中，用滴管吸取80%的乙醇将研体和玻璃棒反复洗净，清洗液也要过滤到比色管中。再用80%乙醇洗涤残渣数次，滤纸至无绿色，合并滤液，定容到刻度，摇匀。
（2）读取吸光度：取1cm的洁净比色皿，不要用手接触比色皿的光面，先用少量色素提取液清洗比色皿3次，然后再将色素提取液倒进比色皿中，液面高度约为比色皿高度的4/5，并用滤纸洗掉比色皿外围多余的提取液，最后用擦镜纸擦干净整个比色皿。把比色皿放进比色皿架上，第一个位置放盛有80%乙醇做空白对照，将仪器波长分别调到663nm、645nm处，以80%乙醇作为空白对照调透光率100%，分别测定其光密度。
3.3 实验结果计算
按照下列Arnon公式计算材料中叶绿素a、b及叶绿素的总含量。
Chla含量（mg g-1）=（12.7OD663-2.69OD645）
Chlb含量（mg g-1）=（22.9OD645-4.68OD663）
比较分析不同植物的叶绿素含量差异及同种植物在不同生长环境下 Chla/Chlb的差异。
3.4 注意事项：
（1）叶绿素提取准备工作要在半暗房间进行，温度保持在25°C；
（2）叶绿素提取液不能浑浊，一定要提取干净，避免造成测定时的误差，；
（3）提取叶绿体中色素的关键是：叶片要新鲜，研磨时间要短些；
（4）初提液体积不易过多，以免浪费试剂，但是浓度高的情况下可适当进行稀释；
4、结论
叶绿素的含量变化与植物生长发育状况以及环境变化密切相关，由于试验材料的差异以及实验中使用的分光光度计性能的不同，导致实验研究过程中测得的叶绿素含量等结果之间存在很大的差异，特别是Chla/Chlb的相对比值差异更大。因此要使用具有波长自动校准功能、波长精度较高的双光束分光光度计，这样实际测得的Chla/Chlb的相对比值不仅与相应的理论值接近，而且叶绿素定量结果之间也有较好的可比性和重现性。
参考文献
[1].刘秀丽，宋平，孙成明（1999）.植物叶绿素测定方法的再探讨.江苏农业研究，20 （3）：46-47
[2].王学奎（1983）植物生理生化实验原理和技术（第二版）.北京：高等教育出版社，134-136
[3].张如美，孙晓斌.对叶绿素方法测定的改进[J]环境监测管理与技术，2002，15（2）：31