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原癌基因c-met mRNA实时荧光定量PCR参考标准的构建

来源 :临床检验杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户：liangpask

【摘 要】

：

目的构建实时荧光定量PCR(FQ-PCR)标准以定量检测原癌基因c-met mRNA的表达.方法以Trizol裂解抽提法提取新鲜肝组织总RNA.以RT-PCR法制备c-met cDNA目的片段并进行扩增;以A-T

【作 者】

：

岑东 吕建新 裴仁治 

【机 构】

：

鄞州人民医院检验科,温州医学院检验医学与公共卫生学院

【出 处】

：

临床检验杂志

【发表日期】

：

2005年2期

【关键词】

：

C-MET FQ-PCR 重组质粒 原癌基因 实时荧光定量PCR 参考标准 RNA 限制性酶切 片段 碱裂解法 proto-oncogene c-met mRN 

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目的构建实时荧光定量PCR(FQ-PCR)标准以定量检测原癌基因c-met mRNA的表达.方法以Trizol裂解抽提法提取新鲜肝组织总RNA.以RT-PCR法制备c-met cDNA目的片段并进行扩增;以A-T载体克隆法将纯化的目的片段与pGEM-T Easy Vector连接成重组质粒并转化E.coli DH5α.采用碱裂解法提取重组质粒,联合用直接PCR、α互补法和氨苄青霉素筛选法、EcoRⅠ限制性酶切和序列分析法鉴定其特异性.用聚乙二醇沉淀法纯化质粒并测定A260,从而确定原液的重组质粒拷贝浓度并

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