应用反转录-套式PCR方法检测肾综合征出血热病人血清中的汉坦病毒特异性RNA

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采用5′端生物素标记汉滩病毒特异性寡核苷酸探针,结合磁性分离技术和异硫氰酸胍-酚一步法(胍酚法)提取病毒RNA,进行反转录-套式PCR,检测肾综合征出血热(HFRS)病人血清样本,胍酚法能检测血清中至少几个PFU病毒的RNA,比磁珠法敏感10倍,整个检测过程在5小时完成。应用该方法对137份汉滩型和汉城型HFRS病人血清进行检测分型,总阳性率达60.50%。其中,病程在7日以内(急性期)的病人血清仍能检测到22.73%阳性率。扩增产物经打点杂交检测证实为特异性扩增,并能准确分型。与空斑减少中和试验(PRNT)分型的符合率为100%。对20份正常人及24份非HFRS患者血清进行PCR扩增,结果均为阴性。将全部试剂做成试剂盒,为基层单位早期诊断肾综合征出血热病人提供了操作简便、特异、敏感、快速、直接的诊断方法。
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