【摘 要】
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该文探讨了RNAscope多通道荧光检测技术在类器官中的应用并建立了相应的实验体系,旨在为类器官的研究提供更多的技术与方法.该研究采用磁珠分选方法从大鼠肺组织中分选Ⅱ型肺泡上皮细胞(alveolar epithelial type Ⅱ cells,AEC2s),并采用免疫荧光鉴定AEC2s细胞的纯度,对分离的AEC2s细胞进行肺类器官培养,培养第15天时采用倒置显微镜观察肺类器官的生长规律,HE染色观察肺类器官的形态结构特征,RNAscope多通道荧光检测技术检测肺类器官原位单细胞中Sftpc、Aqp5、
【机 构】
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陆军军医大学大坪医院战创伤医学中心,重庆400042;创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室,重庆400042
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该文探讨了RNAscope多通道荧光检测技术在类器官中的应用并建立了相应的实验体系,旨在为类器官的研究提供更多的技术与方法.该研究采用磁珠分选方法从大鼠肺组织中分选Ⅱ型肺泡上皮细胞(alveolar epithelial type Ⅱ cells,AEC2s),并采用免疫荧光鉴定AEC2s细胞的纯度,对分离的AEC2s细胞进行肺类器官培养,培养第15天时采用倒置显微镜观察肺类器官的生长规律,HE染色观察肺类器官的形态结构特征,RNAscope多通道荧光检测技术检测肺类器官原位单细胞中Sftpc、Aqp5、krt5、ki67等四个RNA的基因表达情况.结果 表明,RNAscope多通道荧光检测技术在类器官应用中具有可行性,该技术能实现类器官单细胞水平同时分析多个RNA的表达水平,在获得单细胞中拷贝RNA表达数据的同时提供完整的组织形态学信息,提高对疾病与标志物之间复杂的生物学相关性认识,因此,RNAscope多通道荧光检测技术为类器官在单细胞水平的研究开辟了新的途径.
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为探讨miR-486-3p对乳腺癌细胞MCF-7凋亡的调控作用,采用qRT-PCR法和Western blot法测定24例乳腺癌组织和癌旁正常组织miR-486-3p和凋亡相关蛋白的表达水平;采用qRT-PCR法测定乳腺癌细胞MCF-7、HBL101和正常乳腺细胞MCF 10A中miR-486-3p的表达水平.将MCF-7、HBL101和MCF10A细胞分为正常对照组、模拟物对照组、miR-486-3p模拟物组、抑制物对照组和miR-486-3p抑制物组,各组细胞转染后进行培养,采用CCK-8法测定各组细
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